兩種不同來源神經干細胞的神經遞質表達研究.pdf

1、目的:神經遞質是發(fā)生突觸聯系的中介,通過傳遞各種信息調節(jié)機體生理功能。對于神經元發(fā)育缺陷或損傷導致的疾病,選自更易分化為特定區(qū)域所需的神經元的神經干細胞,可能更有利于細胞定植、與缺陷區(qū)域建立功能聯系,達到更好的移植效果。腦神經干細胞已廣泛用于各種神經退行性疾病或損傷的移植治療,而腸神經干細胞,目前處于研究初期階段,在進入臨床應用研究以前,尚有許多問題需要解決。本實驗研究具代表性的γ-氨基丁酸、一氧化氮、乙酰膽堿、去甲腎上腺素等四種遞質在

2、腦神經干細胞和腸神經干細胞中的表達,為今后如何獲得合適的、有功能的、能長期使用的移植干細胞提供理論和實驗依據。
　　 方法:1.采用神經干細胞培養(yǎng)液,以反復傳代法從胚胎20天SD大鼠提取兩種神經干細胞。
　　 2.經形態(tài)學觀察及特異性抗原Nestin免疫組織化學染色,以確定分離培養(yǎng)的兩種細胞是否為神經干細胞。
　　 3.經5％胎牛血清誘導分化4天后,免疫熒光化學染色觀察形成的不同類型神經元。
　　 4.傳

3、代得到的兩種神經干細胞經瓊脂糖預包埋制成石蠟切片,進行GABA、nNOS、ChAT和DB H免疫組化檢測,IPP軟件圖像分析。
　　 5.流式細胞儀檢測兩種神經干細胞GABA、nNOS、ChAT和Dβ H染色陽性細胞數目及比例。
　　 結果:1.兩種神經干細胞均能出現神經球樣結構,腦來源的神經球較早出現懸浮生長,且增大迅速,進一步培養(yǎng)兩種神經球球體中心出現發(fā)黑及老化現象。
　　 2.培養(yǎng)的兩種來源的細胞陽性表達N

4、estin,確認培養(yǎng)的兩種細胞含有神經干細胞。
　　 3.兩種神經干細胞經胎牛血清的誘導分化后,免疫熒光化學染色均能觀察到表達γ-氨基丁酸、一氧化氮、乙酰膽堿及去甲腎上腺素的四種不同類型神經元。
　　 4.將瓊脂糖預包埋石蠟切片技術應用于神經干細胞免疫組織化學檢測,能解決脫片、細胞重疊等問題。
　　 5.消化道來源的神經干細胞,GABA組、nNOS組、ChAT組及Dβ H組與空白對照組的累積面積、平均光密度和10

5、D相比,nNOS組和ChAT組差異有統計學意義(P<0.01),另外兩組差異沒有統計學意義(P>0.05)。
　　 6.腦來源的神經干細胞,GABA組、nNOS組、ChAT組及Dβ H組與空白對照組的累積面積、平均光密度和IOD相比,nNOS組、ChAq、組和Dβ H組差異有統計學意義(P<0.01),GABA組差異沒有統計學意義(P>0.05)。
　　 7.兩種神經干細胞nNOS組和IChAT組相同參數分別比較,累積面

6、積、平均光密度和10D差異均有統計學意義(P<0.01)。
　　 8.流式細胞儀測定,消化道來源的神經干細胞GABA、nNOS、ChAT、Dβ H陽性細胞分別為0.47％、14.13％、5.31％、0.06％；而腦來源的神經干細胞GABA、nNOS、ChAT、Dβ H陽性細胞分別為1.86％、5.8％、25.01％、8.8％。
　　 結論:1.消化道來源的神經干細胞表達的神經遞質主要為一氧化氮和乙酰膽堿,且以一氧化氮為主

7、,故可能宜作為一氧化氮陽性神經元缺如性疾病的移植細胞源。
　　 2.腦來源的神經干細胞表達的神經遞質為一氧化氮、乙酰膽堿和去甲腎上腺素,且以乙酰膽堿為主,故可能宜作為乙酰膽堿陽性神經元缺如性疾病的移植細胞源。
　　 3.兩種神經干細胞均不表達γ-氨基丁酸,提示對γ-氨基丁酸陽性神經元缺如性疾病進行移植治療時,需要在移植前對神經干細胞進行誘導后,才可能到達較好的移植效果。
　　 4.腦來源的神經干細胞可能更適合作為