sCD40L聯合LY294002對胃癌AGS細胞生長及侵襲轉移影響的實驗研究.pdf

1、第一部分sCD40L對胃癌AGS細胞生長的影響
　　 目的:探討sCD40L，（可溶性CD40配體）對胃癌AGS細胞體外生長和凋亡的影響。
　　 方法:采用不同濃度sCD40L處理胃癌AGS細胞，四氮唑鹽（MTT）法檢測AGS細胞經sCD40L作用后生存率的變化，流式細胞術（FCM）檢測AGS細胞周期和凋亡的變化。
　　 結果:MTT結果顯示一定濃度的sCD40L可抑制AGS細胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間

2、的延長而明顯增強（P<0.05）。流式細胞術顯示AGS細胞經sCD40L作用48h后，細胞周期阻滯于G1期，G1期細胞比例上升，S期細胞比例下降，并呈現濃度依賴性（P<0.05），AGS細胞經sCD40L作用48h后，細胞無明顯的凋亡現象（凋亡率<5％）。
　　 結論:sCD40L通過阻滯細胞周期抑制胃癌AGS細胞生長，作用呈時間和劑量依賴性。
　　 第二部分LY294002對胃癌AGS細胞生長的影響
　　 目的

3、探討LY294002（P13K/Akt信號通路特異性阻斷劑）對胃癌AGS細胞體外生長和凋亡的影響。
　　 方法:采用不同濃度LY294002處理胃癌AGS細胞，MTT法檢測AGS細胞經LY294002作用后生存率的變化，流式細胞術檢測.AGS細胞周期和凋亡的變化。
　　 結果:MTT結果顯示一定濃度的LY294002可抑制AGS細胞的生長，并隨著濃度的增加和作用時間的延長而明顯增強（P<0.05）。流式細胞術顯示AGS細

4、胞經LY294002作用48h后，細胞周期阻滯于G1期，G1期細胞比例上升，S期細胞比例下降，AGS細胞有明顯凋亡，并呈現濃度依賴性（P<0.05）。
　　 結論:LY294002通過阻滯細胞周期及誘導細胞凋亡抑制胃癌AGS細胞的生長，且呈時間和劑量的依賴性。
　　 第三部分sCD40L聯合LY294002對胃癌AGS細胞生長及侵襲轉移的影響
　　 目的:探討sCD40L聯合LY294002對胃癌AGS細胞體外生

5、長及侵襲、轉移的影響，并初步探討其可能的作用機制。
　　 方法:MTT法檢測sCD40L（2ug/m1）、LY294002（20gmol/L）及兩者聯合應用對AGS細胞生長的影響；流式細胞術觀察AGS細胞凋亡和細胞周期的變化；透射電鏡檢測AGS細胞形態(tài)變化；Transwell實驗和劃痕實驗分析AGS細胞侵襲、轉移能力的改變；免疫印跡法（Western blot）檢測AGS細胞P13K、p-Akt、VEGF蛋白的表達。
　　

6、 結果:（1）MTT結果顯示，sCD40L和LY294002均能抑制胃癌AGS細胞生長，兩者聯合作用后具有協同效應（P<0.05）；（2）流式細胞術顯示，LY294002及sCD40L均可阻滯AGS細胞周期，兩者聯合作用細胞周期阻滯明顯增強（P<0.05），sCD40L對AGS細胞凋亡無明顯影響，LY294002可誘導AGS細胞凋亡，兩者聯合作用后細胞凋亡明顯增加（P<0.05）；（3）透射電鏡檢測顯示，對照組及sCD40L組AGS細

7、胞未出現明顯的凋亡形態(tài)學改變，而聯合用藥組的部分細胞出現細胞核固縮，染色質呈新月狀邊集等凋亡形態(tài)學改變；（4）Transwell實驗和劃痕實驗顯示sCD40L及LN29400均可抑制AGS細胞的侵襲、轉移，兩者聯合作用后對AGS細胞的侵襲、轉移抑制明顯增強（P<0.05）；（5）Western blot結果顯示，與對照組相比，sCD40L組AGS細胞PI3K、p-Akt蛋白表達明顯升高，LY294002組與聯合用藥組AGS細胞P13K、