NaNO2預(yù)處理對(duì)過(guò)氧化損傷PC12細(xì)胞的保護(hù)作用.pdf

1、目的：探討低劑量亞硝酸鈉（NaNO2）預(yù)處理對(duì)過(guò)氧化損傷鼠腎上腺嗜鉻細(xì)胞瘤（PC12）細(xì)胞的保護(hù)作用；同時(shí)觀察其誘導(dǎo)PC12 細(xì)胞分化的作用。
　　 方法：分別以系列濃度的NaNO2 作用PC12 細(xì)胞不同時(shí)間，采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)NaNO2 對(duì)PC12 細(xì)胞活力的影響，研究劑量-效應(yīng)和時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系，尋找最低促增殖效應(yīng)劑量和最佳促增殖效應(yīng)時(shí)間。過(guò)氧化損傷PC12 細(xì)胞模型制作采用400mmol·L-1 乙醇、45

2、 mmol·L-1 NaNO2、1.1 mmol·L-1 過(guò)氧化氫（H2O2）處理2 h。細(xì)胞增殖指標(biāo)采用MTT、活細(xì)胞計(jì)數(shù)法、Hoechst33258 熒光單染計(jì)數(shù)有絲分裂指數(shù)；細(xì)胞凋亡檢測(cè)采用Hoechst33258染色計(jì)數(shù)細(xì)胞凋亡率、流式細(xì)胞術(shù)(FITC-annexin/PI)Ⅴ雙染法和Hoechst 33258/PI活細(xì)胞染色法；比色法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)活力和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙

3、二醛（MDA）含量。Western-blotting 檢測(cè)相關(guān)蛋白表達(dá)。瑞氏染色觀察PC12 細(xì)胞分化狀態(tài)。
　　 結(jié)果：MTT 結(jié)果顯示，低劑量NaNO2 促進(jìn)細(xì)胞增殖，高劑量抑制其增殖，劑量-效應(yīng)關(guān)系呈典型的倒U 型曲線。NaNO2 最低促增殖劑量為（促增殖效應(yīng)高于對(duì)照組的15％）0.14 mmol·L-1，最佳促增殖效應(yīng)時(shí)間點(diǎn)出現(xiàn)在第24 h；400 mmol·L-1 乙醇、45mmol·L-1的NaNO2、1.1 mmo

4、l·L-1 H2O2 作用PC12 細(xì)胞2 h，流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，細(xì)胞凋亡率分別為(50.63±2.14)％、(52.06±8.32)％、(53.6±8.51)％，用0.14 mmol·L-1NaNO2 預(yù)處理細(xì)胞24 h，再分別用上述氧化劑作用2 h，細(xì)胞凋亡率分別下降為（19.71±3.19）％、(19.65±2.17)％、(18.23±4.19)％ 差異具有顯著性（P﹤0.05）；用0.14mmol·L-1 NaNO2和一氧化氮

5、清除劑(c-PTIO)預(yù)處理細(xì)胞24 h，再用上述氧化劑作用2 h，細(xì)胞凋亡率則分別為（32.28±7.31）％、(38.63±5.08)％、(30.75±3.81)％。Hoechst33258染色、Hoechst 33258/PI活細(xì)胞染色計(jì)數(shù)細(xì)胞死亡率結(jié)果與其相似。
　　 用400 mmol·L-1 乙醇作用PC12 細(xì)胞2 h，SOD、CAT 酶活性，GSH-Px、MDA 含量分別為(20.95±1.68)U/mg.Pro

6、t、(11.45±0.93)U/mg.Prot、(41.17±2.72)μmol/mg.Prot、(98.38±11.5)μmol/mg1.Prot，用NaNO2 預(yù)處理細(xì)胞再用乙醇作用，SOD、CAT 酶活性和GSH-Px、MDA 含量分別為（62.38±2.98）U/mg.Prot、(19.29±0.27)U/mg.Prot、(62.59±1.41)μmol/mg.Prot、(49.38±2.93)μmol/mg.Prot;用NaN

7、O2+c-PTIO 預(yù)處理細(xì)胞24 h，再用乙醇作用2 h，SOD、CAT 酶活性和GSH-Px、MDA 含量分別為（40.23±1.57）U/mg.Prot、(15.98±1.9)U/mg.Prot、(51.21±1.52)μmol/mg.Prot、(73.58±14.7)μmol/mg.Prot。用NaNO2預(yù)處理再用乙醇作用組，與單純乙醇組相比，Bax、Caspase-9、Caspase-3蛋白表達(dá)量降低，Bcl-2和HIF-1α

8、蛋白表達(dá)量升高（P﹤0.05）；c-PTIO 可以部分逆轉(zhuǎn)這種現(xiàn)象。45mmol·L-1 NaNO2和1.1 mmol·L-1 H2O2 處理細(xì)胞，上述各指標(biāo)變化情況與乙醇組一致。瑞氏染色結(jié)果顯示，0.14 mmol·L-1 NaNO2 作用PC12 細(xì)胞48 h，明顯促進(jìn)PC12 細(xì)胞突起生長(zhǎng)，缺氧誘導(dǎo)因子（HIF-1α）、血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）表達(dá)量增加，作用效果類似神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)。C-PTIO 可以部分抑制這種現(xiàn)象。