P38MAPK介導Fas-FalL凋亡信號通路在大鼠抗GBM腎炎中作用的研究.pdf

1、目的：復制大鼠抗腎小球基底膜(GBM)腎炎模型，探討p38MAPK介導的Fas/FasL凋亡信號通路在大鼠抗GBM腎炎中的作用，為進一步闡明人類新月體性腎炎的致病機制及其防治提供理論基礎(chǔ)。
　　 方法：1．復制大鼠抗GBM腎炎模型，實驗分為腎炎模型組和正常對照組，腎炎模型組大鼠一次性注射兔抗大鼠GBM血清，正常對照組大鼠尾靜脈注射等量正常兔血清，劑量均為1ml/100g。腎炎模型組于實驗前1W足墊皮內(nèi)注射正常兔血清進行預免疫。于

2、實驗第2d、7d、14d、21d、28d行如下處理：收集24h尿液檢測24h尿蛋白，收集血清樣本檢測血肌酐及血尿素氮含量；取腎組織經(jīng)光鏡觀察腎組織病理變化。2．應用Western blot法檢測第2d、7d、14d、21d、28d腎組織標本中p38MAPK、p-p38MAPk、Fas、FasL蛋白的表達情況。3．運用阻斷劑SB203580阻斷p38MAPK磷酸化，觀察抗GBM腎炎大鼠的生化指標、病理改變、細胞凋亡等情況。實驗隨機分為三組

3、：阻斷劑組，溶媒組，腎炎模型組。阻斷劑組于注射兔抗大鼠GBM血清后3h、第3d、5d、7d、9d、11d、13d腹腔注射SB203580,1mg/kg;溶媒組用相同的方法注射等量DMSO。于實驗第2d、7d、14d行如下處理：收集24h尿液和血清樣本檢測24h尿蛋白、血肌酐及血尿素氮含量；第14d取腎組織行如下處理：光鏡觀察腎組織病理變化；TUNEL法檢測大鼠腎組織細胞凋亡情況；Western blot和免疫組織化學法檢測腎組織p38M

4、APK、p-p38MAPk、Fas、FasL蛋白表達情況；
　　 結(jié)論：1．與正常對照組相比，腎炎模型組大鼠尾靜脈注射兔抗大鼠GBM血清后，24h尿蛋白、血肌酐和血尿素氮含量均明顯升高(P＜0.05）；光鏡觀察到腎小球內(nèi)細胞數(shù)第7d明顯增加，第14d可見大量炎癥細胞浸潤，腎小管內(nèi)可見大量蛋白管型；2.Western blot結(jié)果顯示腎炎模型組和正常對照組比較，p38MAPK表達于各時間點均無差異(P＞0.05)；而p-p38MA

5、PK腎炎模型組于各時間點均明顯高于正常對照組(P＜0.05); Fas、FasL蛋白表達量從第2d開始升高，到第14d達到峰值，隨后有下降趨勢，但仍高于正常對照組(P＜0.05)。3．阻斷劑組大鼠尿蛋白、血肌酐和血尿素氮含量均明顯低于溶媒組及腎炎模型組(P＜0.05)；光鏡觀察到腎小球內(nèi)細胞數(shù)目低于溶媒組及腎炎模型組，腎小管內(nèi)未見蛋白管型；TUNEL法顯示凋亡細胞陽性率明顯低于溶媒組及腎炎模型組(P＜0.01);Westernblot及