幽門螺桿菌相關胃癌基因差異表達譜的研究.pdf

1、我國胃癌的發(fā)生率在各類惡性腫瘤中位居第二，是嚴重危害人民身體健康的疾病。20世紀80年代以來，在人群中具有較高感染率的幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)與胃癌的關系已受到廣泛關注。流行病學證實，Hp慢性感染是導致胃癌的重要危險因素之一，與胃癌的發(fā)生發(fā)展密切相關，感染人群患胃癌的風險比非感染者高4倍。大多數(shù)研究表明在“慢性胃炎-胃黏膜萎縮-腸化生-異型增生-胃癌”這一癌變模式中，Hp可能起著先導作用。1998年Wa

2、tanabe等首次報道up感染的蒙古沙土鼠可發(fā)生胃癌，這是Hp感染可誘發(fā)胃癌的直接證據(jù)。1994年，世界衛(wèi)生組織國際癌癥研究機構(IARC)正式將Hp列為胃癌的Ⅰ類致癌原。但Hp引起胃癌的機制尚未完全闡明。
　　 胃癌的發(fā)生是一個多病因、多階段的過程，感染Hp后，其結局可能發(fā)生慢性胃炎，也可能發(fā)展為胃癌。提示不同的菌株可能對胃黏膜上皮細胞產(chǎn)生不同的影響，導致不同程度的疾病發(fā)生。
　　 本實驗選用臨床分離自胃癌、胃炎患者的

3、菌株各10例分別和GES-1細胞以不同濃度比例共培養(yǎng)，12h、24h和48h后分別收獲細胞，進行MTT和流式細胞儀檢測。結果顯示不同來源的Hp菌株對GES-1細胞在增殖方面的影響具顯著性差異，低濃度菌液可不同程度地促進細胞增殖，高濃度菌液則抑制細胞增殖活性，并且隨著時間延長，低濃度菌液促細胞增殖作用逐漸增強，高濃度菌液對細胞增殖的抑制作用也越發(fā)明顯。不同疾病來源的Hp菌株均會引起胃黏膜上皮細胞凋亡率增加，但組間差異無顯著性。隨著時間的延

4、長和細菌濃度的提高，Hp菌株促胃黏膜上皮細胞凋亡的影響越發(fā)顯著。
　　 分別挑選出對GES-1細胞的增殖影響最顯著和最小的兩株Hp菌株，分別和GES-1細胞共培養(yǎng)，收獲細胞后提取RNA產(chǎn)物與全基因組表達譜芯片雜交后進行統(tǒng)計分析。結果顯示Hp感染GES-1細胞后引起胃黏膜上皮細胞基因表達譜廣泛地改變，這些差異表達基因與原癌基因與抑癌基因的激活或失活、細胞周期、細胞骨架和運動、細胞凋亡、DNA的合成、轉錄、細胞信號、蛋白質的翻譯、物

5、質和能量代謝等過程有關。篩選出一些與腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關的基因，如TRAF1、HDAC6、ETS1、JUN、JUNB、CLDN1、CXCL2、IL-8、IRAK2、NUPR1、STC2、TP53BP1、TNFAIP3、DIO2以及SR蛋白家族，為下一步的基因表達驗證和生物學功能研究提供了新的線索。
　　 在基因芯片的結果中挑選出差異性較大且科研意義較高、目前在Hp相關性胃癌發(fā)病機制尚未見報道的兩個基因：TRAF1和HDAC6。

6、將挑選出的對GES-1細胞的增殖影響最顯著和最小的兩株Hp菌株，分別和GES-1細胞共培養(yǎng)，用空白組進行對照，共分為對照組、胃炎組和胃癌組，共培養(yǎng)24小時后。收獲細胞提取RNA產(chǎn)物，逆轉錄后得到cDNA，進行RT-PCR檢測，結果發(fā)現(xiàn)TRAF1和HDAC6在對照組、胃炎組、胃癌組中的表達依次增強，與基因芯片結果一致。
　　 利用取自于臨床的伴Hp感染的慢性淺表性胃炎、萎縮性胃炎(病檢示腸上皮化生、不典型增生)及胃癌患者的標本進行