疏水蛋白與生物活性肽的融合表達及其性質(zhì)的研究.pdf

1、真菌疏水蛋白是絲狀真菌產(chǎn)生的小分子量蛋白質(zhì)，其最大特點是能夠在界面形成一層雙親性的蛋白膜以此來反轉(zhuǎn)所覆蓋界面的性質(zhì)。疏水蛋白HGFⅠ作為疏水蛋白家族的一個成員，具有自組裝成膜的性質(zhì)，是優(yōu)良的表面活性劑，本實驗室對于疏水蛋白HGFⅠ有完善與系統(tǒng)的研究。
　　生物活性多肽具備巨大的應(yīng)用潛力，目前治療性多肽的研究已涉及到腫瘤、心血管疾病、糖尿病、關(guān)節(jié)炎、以及中樞系統(tǒng)疾病等各個方面，例如本文的一個研究對象——一類廣譜抑菌素乳酸片球菌素(p

2、ediocin)，它能能抑制絕大多數(shù)革蘭陽性菌的生長，針對單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）菌屬效果尤佳;本文另一個研究對象是一類含十個氨基酸殘基的寡肽CTT(CTTHWGFTLC)，它能準(zhǔn)確定位于腫瘤新生血管的發(fā)生部位。這些生物活性肽對于解決諸如抗生素耐藥性與靶向腫瘤治療等難題有巨大的應(yīng)用價值。然而這些生物活性肽距離臨床治療還有很長的距離，原因就是多肽本身的許多特征和因素限制了其應(yīng)用效果，例如半衰期短

3、，易被酶類降解，無特異性等等。
　　因此，用具有雙親性質(zhì)的真菌輸水蛋白HGFⅠ對生物活性肽進行修飾以補償其應(yīng)用缺陷非常有意義?！狙芯恐?，以pediocin和CTT兩個生物活性肽為例，可以利用疏水蛋白HGFⅠ將pediocin在作用位點富集，并且自組裝成有極性的膜，以實現(xiàn)生肉類產(chǎn)品對空氣中的腐敗菌單核細胞增生李斯特菌菌屬細菌的預(yù)防效果，或者利用CTT與HGFⅠ融合工程蛋白實現(xiàn)抗腫瘤藥物靶向定位的效果等等，為疏水蛋白HGFⅠ對生物

4、活性肽的修飾提供必要的指導(dǎo)與借鑒。
　　文章涉及的工作從分子生物學(xué)手段上游起始，分別進行了HGFⅠ、pediocin、CTT片段的獲得工作，實現(xiàn)了融合片段在大腸桿菌內(nèi)克隆載體的構(gòu)建。隨后采用異源表達，利用畢赤酵母真核表達系統(tǒng)將融合片段轉(zhuǎn)入酵母菌株GS115中進行真核表達，所用三個融合蛋白的表達載體pPIC9也有穿梭載體的性質(zhì)。真核表達采用畢赤酵母表達系統(tǒng)，這個系統(tǒng)由于簡便經(jīng)濟、表達量高、易于控制等優(yōu)勢成為本研究針對質(zhì)粒重組和外源蛋