Migfilin在食管鱗癌中的表達差異和功能研究.pdf

1、Migfilin是LIM結構域家族成員，主要位于胞漿中，介導蛋白之間的相互作用，參與局部黏附和細胞骨架之間的聯(lián)系，從而影響細胞的形態(tài)和運動能力。Migfilin還可通過RNA剪切和鈣離子激活的方式進入細胞核內，參與相關基因的轉錄調控。
　　 通過免疫組織化學的方法發(fā)現(xiàn)migfilin在食管癌和正常組織中存在表達差異，采用Westernblot的方法進一步在蛋白水平上驗證了這一結果。此外，經(jīng)實時定量PCR的方法還發(fā)現(xiàn)，migfil

2、in的表達與食管癌淋巴結轉移呈現(xiàn)負相關的關系，這表明migfilin的表達可能與食管癌的遠處轉移和惡性轉化相關。
　　 為了研究migfilin在食管癌中的功能，我們將migfilin真核表達質粒轉染至migfilin低表達的食管癌細胞系KYSE450中并建立了穩(wěn)定高表達migfilin的KYSE450亞克隆細胞。功能研究表明，migfilin過表達不影響細胞的增殖、凋亡和細胞周期的運轉，但可促進細胞與胞外基質成分Fibrone

3、ctin之間的黏附，并可抑制細胞的穿膜能力以及細胞對基質的侵襲能力。免疫熒光顯示，migfilin過表達的細胞極性減弱，偽足增多。此外，應用siRNA在migfilin高表達的食管癌細胞系KYSE150細胞中敲降migfilin的表達，發(fā)現(xiàn)migfilin的表達被干擾后細胞侵襲和遷移運動能力增強。
　　 為進一步揭示migfilin引起細胞黏附、運動和形態(tài)改變的分子機理，我們檢測了migfilin的表達改變對與細胞黏附和細胞骨架

4、結構密切相關的一系列分子的影響。結果發(fā)現(xiàn)在migfilin過表達的細胞中β-catenin的表達下調，同時在293T細胞中瞬時轉染migfilin抑制了β-catenin的轉錄活性。經(jīng)進一步研究顯示migfilin過表達所引起的β-catenin表達下調與其被GSK-3β磷酸化及隨后的泛素化-蛋白酶降解相關。Migfilin通過促進GSK3β與β-catenin的相互作用，從而增強了GSK3β對β-catenin的磷酸化，磷酸化后的β-

5、catenin將易于被E3泛素連接酶β-TrCP所識別，進入泛素化-蛋白酶降解途徑。敲降migfilin，表達GSK3β磷酸化位點突變的β-catenin，加入GSK3β抑制劑LiC1或蛋白酶抑制劑MG132能使胞漿β-catenin表達上升，并恢復其轉錄活性，說明migfilin是通過GSK3β和蛋白酶途徑來調節(jié)β-catenin的蛋白穩(wěn)定性的。此外，migfilin還可以通過抑制PI3K/Akt通路來上調GSK3β的酶活性，從而降低

6、β-catenin的蛋白表達。而加入PI3K的抑制劑LY294002，則完全廢除了敲降migfilin所引起的PI3K/Akt通路上的相關信號分子的激活。在migfilin過表達的穩(wěn)定克隆中恢復β-catenin的表達能部分恢復細胞的侵襲能力，說明migfilin對細胞活動能力的影響至少部分是由于migfilin引起的β-catenin的蛋白降解所介導的。
　　 綜上所述，我們認為migfilin應該是通過影響食管癌細胞的黏附形