rh-Apo2L聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱誘導(dǎo)人肺鱗癌細(xì)胞凋亡及相關(guān)機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　觀察rh-Apo2L、長(zhǎng)春瑞濱及兩藥聯(lián)合對(duì)人肺鱗癌細(xì)胞（SK-MES-1）的增殖抑制和凋亡作用；探討rh-Apo2L聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱誘導(dǎo)人肺鱗癌細(xì)胞（SK-MES-1）凋亡的相關(guān)機(jī)制。
　　方法：
　　1、檢測(cè)rh-Apo2L、長(zhǎng)春瑞濱分別對(duì)人肺鱗癌細(xì)胞株（SK-MES-1細(xì)胞）的體外增殖影響：采用CCK-8法檢測(cè)不同濃度的rh-Apo2L、長(zhǎng)春瑞濱干預(yù)SK-MES-1細(xì)胞24小時(shí)和48小時(shí)后，各組細(xì)胞的增殖抑

2、制情況，計(jì)算藥物半數(shù)抑制濃度（IC50），并選擇亞毒性藥物濃度用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)研究。
　　2、檢測(cè)rh-Apo2L、長(zhǎng)春瑞濱對(duì)人肺鱗癌細(xì)胞株（SK-MES-1細(xì)胞）的凋亡作用：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SK-MES-1細(xì)胞分為四組，分別為空白對(duì)照組、rh-Apo2L組、長(zhǎng)春瑞濱組、r h-Apo2L聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱組，給予相應(yīng)藥物干預(yù)24小時(shí)后，在顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化，并采用AnnexinV-FITC/PI雙染流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡情況

3、。
　　3、檢測(cè)不同組的凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)情況：采用Western blot技術(shù)檢測(cè)上述分組藥物干預(yù)SK-MES-1細(xì)胞24小時(shí)后，細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白DR4、DR5、Caspase-3表達(dá)的情況。
　　結(jié)果：
　　1、CCK-8法檢測(cè)結(jié)果顯示：rh-Apo2L在體外對(duì)人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞的增殖具有抑制作用，其抑制作用與藥物濃度之間呈劑量-效應(yīng)正相關(guān)，計(jì)算得到24h、48h rh-Apo2L的IC50分別為28.5

4、7μg/ml、8.97μg/ml；長(zhǎng)春瑞濱在體外也對(duì)SK-MES-1細(xì)胞的增殖具有較強(qiáng)的抑制作用，其抑制作用與藥物濃度之間呈劑量-效應(yīng)正相關(guān)，計(jì)算得到24h、48h長(zhǎng)春瑞濱的IC50分別為27.30μg/ml、7.87μg/ml。rh-Apo2L聯(lián)合長(zhǎng)春瑞濱對(duì)SK-MES-1細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用，與單藥組比較明顯增強(qiáng)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05），計(jì)算出24h、48h聯(lián)合組兩藥相互作用指數(shù)（q值）分別為1.937和2.400，提示rh-

5、Apo2L與長(zhǎng)春瑞濱兩藥聯(lián)合對(duì)SK-MES-1細(xì)胞的抑制作用具有協(xié)同性。
　　2、流式細(xì)胞計(jì)量術(shù)結(jié)果顯示：rh-Apo2L與長(zhǎng)春瑞濱聯(lián)合應(yīng)用干預(yù)24h后，人肺鱗癌SK-MES-1細(xì)胞早期凋亡率為25.64％，與rh-Apo2L單藥組（16.80%）、長(zhǎng)春瑞濱單藥組（5.93%）相比，早期細(xì)胞凋亡率顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；rh-Apo2L與長(zhǎng)春瑞濱聯(lián)合應(yīng)用干預(yù)24h后，聯(lián)合組SK-MES-1細(xì)胞晚期凋亡率為49.2

6、4%，與rh-Apo2L單藥組（11.96%）、長(zhǎng)春瑞濱單藥組（31.38%）相比，晚期細(xì)胞凋亡率顯著增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　3、蛋白印跡法檢測(cè)結(jié)果顯示：與空白對(duì)照組、rh-Apo2L單藥組相比，長(zhǎng)春瑞濱單藥組及兩藥聯(lián)合組上調(diào)了凋亡相關(guān)蛋白DR4、DR5表達(dá)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）；兩藥聯(lián)合組與其他組相比，兩藥聯(lián)合組的Caspase-3表達(dá)增加，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P<0.05）。
　　結(jié)論：