?；撬釋Ρ讲?a)芘致人胚肝細胞DNA損傷的保護作用及其機制研究.pdf

1、目的：苯并(a)芘作為多環(huán)芳烴類(PAHs)的代表，是第一個被發(fā)現的環(huán)境致癌物，具有很強的致癌性，可引起人類的多種癌癥，是自然界和食品中廣泛存在的污染物。而?；撬?Taurine，Tau)是一種人體內含量豐富的具有多種生物學功能的自由氨基酸，其抗氧化對多種肝損傷的保護作用正日益受到關注。?；撬嵩谵卓笲(a)P致肝細胞DNA損傷方面的作用如何，其機制如何，相關文獻報道極少。本研究旨在了解B(a)P對肝細胞DNA損傷作用以及?；撬岬母深A作用

2、，并探索?；撬岬母深A機制。 方法：以人胚細胞(L-02細胞)為靶細胞，采用完全隨機設計的體外培養(yǎng)實驗。L-02細胞常規(guī)培養(yǎng)，取對數生長期、生長良好的細胞進行試驗。?；撬嵩O1.0、2.0、4.0mmol/L3個濃度，B(a)P設12.5、25、50μmol/L三個劑量。試驗隨機分為5組：(1)空白對照組；(2)溶劑對照組；(3)B(a)P染毒組；(4)?；撬峤M：各個濃度牛磺酸加入培養(yǎng)體系后繼續(xù)培養(yǎng)72h；(5)牛磺酸干預組：L-0

3、2細胞先以3個不同濃度的?；撬犷A處理48h，再加入25μmol/L的B(a)P培養(yǎng)24h；進行I相代謝酶(CYP1A1、CYP2B)活性檢測時，增加陽性對照組三甲基膽葸(3-MC)。每組設三個平行樣。運用熒光分光光度法、比色法以及胞質分裂阻滯法微核試驗(CBMNT)，檢測各處理組L-02細胞色素P4501A1(cytochrome P4501A1，CYP1A1)活性(7-乙氧基-3-異吩噁唑酮-脫乙基酶，EROD)、細胞色素P4502B

4、(CYP2B)活性(7-戊氧基-3-異吩噁唑酮—脫戊氧基酶，PROD)及微核率(MN‰)和核分裂指數(NDI)。 結果：(1)B(a)P對人胚肝細胞的毒性：12.5、25、50μmol/L的B(a)P在體外試驗中均能引起L-02細胞明顯的DNA損傷，其誘導的微核率、核分裂指數與溶劑對照組相比差異均有顯著性(P<0.01)；各等級劑量間誘導的DNA損傷有顯著性差異，呈劑量依賴性關系。三個不同劑量的B(a)P均誘導L-02細胞代謝酶

5、CYP1A1、CYP2B酶活性增高，并呈劑量依賴性升高。(2)牛磺酸對B(a)P致L-02細胞損傷的保護作用：1.0-4.0mmol/L的?；撬岣深A組引起的L-02細胞微核率和核分裂指數與溶劑對照組比較無顯著差異，且能明顯減輕25μmol/L的B(a)P引起的肝細胞DNA損傷，其微核率與B(a)P染毒組相比差異有顯著性(P<0.01)，且微核率隨著?；撬釢舛仍龃蠖鴾p小，4.0mmol/L牛磺酸保護作用尤其明顯；各劑量牛磺酸干預組誘導的核

6、分裂指數均比B(a)P染毒組顯著性高(P<0.01)，4.0mmol/L?；撬岣深A組誘導的核分裂指數最高。各濃度?；撬岣深A組細胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性與單純B(a)P染毒組比有顯著性差異(P<0.01)，說明牛磺酸能明顯抑制細胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性。Spearman秩相關分析表明，代表L-02細胞DNA損傷的微核率與細胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性呈明顯正相關(相關系數r及P值分別為F=0.926，P<0

7、.01；r=0.814，P<0.01)；核分裂指數與細胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性成負相關(相關系數r及P值分別為r=-0.416,P<0.05； F=-0.389,P<0.05)。 結論：B(a)P可誘導L-02細胞DNA損傷，在12.5μmol/L較低濃度下即能產生明顯損傷作用；B(a)P誘導肝細胞代謝酶CYP1A1、CYP2B活性增加，并呈劑量依賴性增加。1.0～4.0mmol/L的?；撬岣深A組可拮抗B(a)P誘導