海帶巖藻多糖硫酸酯的分離純化及相關(guān)活性研究.pdf

1、本論文通過(guò)水提法從海帶中提取海帶多糖,然后通過(guò)響應(yīng)面法得到最佳提取條件。首先,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,得出提取pH、提取溫度、提取時(shí)間、料液比四個(gè)因素的最佳值,然后根據(jù)Centralcomposite響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)原理進(jìn)一步優(yōu)化提取條件,得出最佳提取條件為:提取pH3.42、提取溫度83℃、提取時(shí)間3.95 h、料液比1:23,在最優(yōu)條件下,實(shí)際測(cè)得的多糖得率為1.259％,與理論預(yù)測(cè)值相符。
　　 在除蛋白的過(guò)程中,我們采用2種

2、方法對(duì)海帶多糖進(jìn)行了脫蛋白研究,并比較了脫蛋白效果與多糖損失之間的關(guān)系。結(jié)果表明:Sevage沉淀法要好于三氯乙酸法。在純化過(guò)程中,我們采用高速逆流色譜法和DEAE-Sepharose Fast Flow法對(duì)海帶多糖進(jìn)行分離。在溶劑系統(tǒng)為PEG1000:K2HPO4:KH2PO4:H2O=0.5:1.25:1.25:7(w/w)、轉(zhuǎn)速600r/min、流速2.0 mL/min、上樣量1 g的條件下通過(guò)高速逆流色譜將海帶多糖成功的分為KP

3、S.1和KPS-2兩個(gè)組分。然后,再通過(guò)DEAE-Sepharose F.F法將KPS-2分離為KPS-2-1,KPS-2-2,KPS-2-3三個(gè)組分。液相檢測(cè)結(jié)果表明,KPS-2-1為純度較高的海帶巖藻多糖硫酸酯。
　　 在純化得到純度較高的海帶巖藻多糖硫酸酯的基礎(chǔ)上,對(duì)海帶巖藻多糖硫酸酯的理化性質(zhì)和抗氧化活性進(jìn)行了研究。結(jié)果表明:海帶多糖較難溶于冷水,可溶于熱水、稀酸、稀堿,不溶于氯仿、乙醇丙酮、乙醚等有機(jī)溶劑中。1％的海帶

4、多糖溶液溶液的pH為3.48。
　　 本論文對(duì)海帶巖藻多糖硫酸酯的抗氧化活性進(jìn)行了研究。比較了海帶巖藻多糖硫酸酯和BHT、Vc對(duì)DPPH自由基、羥基自由基和超氧陰離子自由基的清除作用。研究發(fā)現(xiàn),海帶巖藻多糖硫酸酯對(duì)上述三種自由基有較強(qiáng)的清除作用,當(dāng)海帶巖藻多糖硫酸酯的濃度分別達(dá)到1:mg/mL、1.6 mg/mL、0.8 mg/mL時(shí),對(duì)三種自由基的清除率分別達(dá)到23.83％,90.84％,99.26％。體現(xiàn)了較好的清除自由基的

5、能力。
　　 以酪氨酸為底物,研究了不同濃度的海帶巖藻多糖硫酸酯(0.2到1.0 mg/mL)對(duì)L-酪氨酸酶的抑制作用。隨著海帶巖藻多糖硫酸酯濃度的增加,酪氨酸酶的活性急劇下降。當(dāng)抑制劑濃度達(dá)到1 mg/mL時(shí),抑制率達(dá)到62.21％。IC50值為0.82 mg/mL。通過(guò)測(cè)定在不同的抑制劑濃度和不同的酶液濃度的條件下的酶活力,可以得出一系列的直線,且每條直線都通過(guò)原點(diǎn)。隨著抑制劑濃度的逐漸增加,直線的斜率逐漸下降,表明海帶巖藻