重組中華鱘半胱氨酸蛋白酶抑制劑生理功能初探.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)室克隆了中華鱘的cystatincDNA并將其連接到真核表達(dá)載體pPICZαA上，隨后轉(zhuǎn)化到畢赤酶母GS115細(xì)胞中，使cystatincDNA整合到酵母染色體DNA上；此重組工程菌經(jīng)誘導(dǎo)培養(yǎng)可以獲得高表達(dá)的重組cystatin，為探討cystatin生理功能奠定了物質(zhì)基礎(chǔ)。為了研究重組cystatin在水產(chǎn)品加工、疾病防治上的應(yīng)用，對(duì)重組cystatin的生理功能進(jìn)行了以下幾個(gè)方面的探索：　　1、重組中華鱘半胱氨酸蛋白酶抑制劑

2、的制備。通過(guò)Bradford法及凝膠薄層掃描測(cè)得重組cystatin的表達(dá)量為每升培養(yǎng)基215mg，約占培養(yǎng)基上清總蛋白量的76.3％?！　?、重組cystatin對(duì)魚(yú)糜中肌漿球蛋白(myosin)的保護(hù)作用，結(jié)果表明：添加重組cystatin可使肌漿球蛋白受內(nèi)源性組織蛋白酶降解的作用得到有效緩解，說(shuō)明cystatin對(duì)肌漿球蛋白具有保護(hù)作用。 3、重組cystatin對(duì)組織蛋白酶B(cathepsinB)的抑制作用，結(jié)果表明

3、，熒光強(qiáng)度與加入的重組cystatin的量成反比。由測(cè)到的數(shù)據(jù)得出cystatin對(duì)cathepsinB的抑制曲線為：y=-0.249x+6.2018，說(shuō)明重組cystatin對(duì)組織蛋白酶有抑制活性?！　?、重組cystatin對(duì)水產(chǎn)致病菌的作用試驗(yàn)。結(jié)果表明，重組cystatin對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖常見(jiàn)病原菌嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)、溫和氣單胞菌(Aeromonassobria)、銅綠假單胞菌(Pseudomon