新型可更新表面電化學免疫傳感器檢測雌二醇的研究.pdf

1、本研究以β-雌二醇為目標物，通過對抗體進行疏水化處理，構建了一種可更新表面的電化學免疫傳感器，實現(xiàn)了電化學傳感器工作電極表面敏感膜的快速更新，克服了以往免疫傳感器抗體固定化過程繁瑣、敏感膜重現(xiàn)性差、再生困難等方面的不足，為電化學傳感器敏感膜的構建及在線檢測提供了一種新方法。主要研究內(nèi)容包括:
　　采用混合酸酐法將雌二醇半抗原與卵清白蛋白(OVA)偶聯(lián)，用BCA試劑盒蛋白定量、紫外光譜、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-P

2、AGE)鑒定偶聯(lián)結(jié)果。紫外掃描結(jié)果表明通過混合酸酐法制備的半抗原與OVA偶聯(lián)物的摩爾吸收系數(shù)約為93238，顯著大于半抗原和載體蛋白。SDS-PAGE實驗結(jié)果顯示偶聯(lián)物純度較高。通過間接競爭ELISA繪制標準曲線，得到β-雌二醇的檢出限為0.52μg/L，證實單克隆抗體與類似物己烯雌酚和孕酮的交叉反應率小于0.01％，具有較高的特異性和親和力。用β-雌二醇對自來水進行加標回收并用間接競爭ELISA測定回收率在78％和134％之間。

3、>　　采用活性酯法活化抗體上的羧基，以氨基壬烷作為疏水化試劑對抗雌二醇單克隆抗體進行了疏水化處理，實驗考察了反應時間、反應介質(zhì)、卵磷脂濃度等因素對反應結(jié)果的影響，凝膠電泳及電化學兩種方法鑒定了抗體的疏水化效果及活性。結(jié)果表明:在室溫條件下，疏水化反應3小時，卵磷脂濃度為1mg/mL時抗體與抗原響應較好。
　　實驗采用三電極檢測系統(tǒng)，以Ag/AgCl電極為參比電極，Pt電極為對電極，修飾抗體成膜液的玻璃電極為工作電極，KCl作為電解