海馬骨粉多肽制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、海馬作為一種具有極高藥用價(jià)值的海洋藥源生物，在我國(guó)一直被視為一種名貴中藥，具有強(qiáng)身健體、補(bǔ)腎壯陽(yáng)、舒經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛、止咳平喘之功效，極具開(kāi)發(fā)保健品潛力。隨著海區(qū)天然資源的過(guò)度捕撈導(dǎo)致野生海馬資源的匱乏，人工養(yǎng)殖已在我國(guó)形成了一定的布局，這也為海馬深加工利用提供了一定的資源基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)主要是以三斑海馬為原料，利用超臨界流體萃取技術(shù)對(duì)海馬骨粉脂肪進(jìn)行萃取工藝研究，并通過(guò) GC-MS對(duì)其脂肪酸進(jìn)行分析；然后應(yīng)用響應(yīng)面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)法對(duì)海馬脫脂骨粉

2、蛋白酶酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化；最后再對(duì)酶解多肽進(jìn)行分離并驗(yàn)證其抗氧化能力的大小。
　　（1）對(duì)成年三斑海馬采用超臨界萃取脂肪工藝研究中，萃取壓強(qiáng)對(duì)海馬骨粉酯類萃取率的影響最大，其次是萃取時(shí)間、萃取溫度和 CO2流量；經(jīng)正交實(shí)驗(yàn)得到萃取海馬骨粉酯類的最佳工藝條件為：萃取壓強(qiáng)35Mpa，萃取溫度58℃，萃取時(shí)間135min，CO2流量15L/h。在此優(yōu)化條件下，海馬骨粉脂質(zhì)萃取率為1.81％。經(jīng) GC-MS分析，所得萃取物中主要含15種脂肪

3、酸，其中不飽和脂肪酸占總脂肪酸的39.10%，EPA和DHA分別占不飽和脂肪酸的5.55%和11.00%。
　　（2）在5種蛋白酶中篩選出兩種酶解效果較好的酶進(jìn)行單因子試驗(yàn)，并在單因子試驗(yàn)基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法對(duì)兩種單酶酶解工藝進(jìn)行優(yōu)化，在優(yōu)化基礎(chǔ)上進(jìn)行復(fù)合酶解效果研究，最后對(duì)選取的最佳酶解效果的酶解液進(jìn)行電泳，測(cè)定多肽分子量分布情況。堿性蛋白酶最佳酶解工藝為：溫度54.70℃、pH9、時(shí)間6h；胰蛋白酶酶解工藝為：溫度45℃、pH

4、8.8、時(shí)間4h；復(fù)合酶解工藝選取先胰蛋白酶酶解再堿性蛋白酶酶解，復(fù)合酶解工藝最佳水解度為14.41%；海馬酶解多肽更多的是在30kDa以下。
　　（3）通過(guò)利用葡聚糖 G-50層析系統(tǒng)來(lái)對(duì)海馬酶解骨粉多肽進(jìn)行分離，并對(duì)分離后的多肽根據(jù)出峰時(shí)間分為三個(gè)區(qū)間，然后分區(qū)間進(jìn)行收集并干燥，再利用對(duì)多肽的還原力、DPPH清除率、超氧陰離子清除率、羥自由基清除率等進(jìn)行測(cè)定其功能，表明海馬骨粉多肽的還原力、DPPH自由基清除率、超氧陰離子自由