果糖提高crtEBI重組大腸桿菌合成番茄紅素產量的研究.pdf

1、番茄紅素是一種重要的類胡蘿卜素,具有良好的抗氧化、抗腫瘤、抗炎等生理藥理活性,因而廣泛應用于功能性食品、飼料、營養(yǎng)制品、藥品和化妝品中。近年來,隨著人們對化學合成品毒副作用的擔心及對天然品的日益崇尚,微生物發(fā)酵法生產番茄紅素,逐漸受到研究人員的重視。
　　為了提高大腸桿菌合成番茄紅素的產量,本研究首先以大腸桿菌DH5α、BL21(DE3)、K-12、JM109為宿主菌,成功構建了4株crtEBI重組大腸桿菌,對番茄紅素產量的分析結

2、果表明以K-12為宿主獲得的番茄紅素產量最高;在此基礎上,通過分析不同條件下重組菌的菌體濃度和番茄紅素的產量,初步確定了E.coliK-12(crtEBI)培養(yǎng)條件。此外,本研究還根據文獻報道,通過PCR技術克隆獲得dxs基因,構建E.coli K-12(crtEBI/dxs)重組菌,但結果顯示番茄紅素產量提高并不明顯;接下來,通過在培養(yǎng)基添加不同的碳源、氮源和TCA中間產物以改變E.coli K-12(crtEBI)重組大腸桿菌番茄紅

3、素的產量,結果證明在LB培養(yǎng)基中添加6g/L果糖后可顯著提高番茄紅素的產量。同時E.coli K-12(crtEBI)生長曲線劑番茄紅素產量曲線的測定結果也顯示果糖是比葡萄糖更為有效的提高番茄紅素產量的附加碳源。實驗進一步用E.coliK-12(crtEBI)進行了5L發(fā)酵罐合成番茄紅素放大實驗,最終獲得番茄紅素的產量約為1800mg/L。最后,通過RT-PCR分析不同條件下FruA、FruK、Glk、PfkA、Pck、Ppc、Pps和