PRRS蜂膠佐劑滅活疫苗的免疫效力研究.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征(PRRS)是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒引起的一種以感染豬發(fā)熱、厭食，妊娠母豬繁殖障礙，仔豬呼吸障礙為特征的高度傳染性疾病。此病常為地方流行性，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的危害。我國(guó)因?yàn)轲B(yǎng)豬產(chǎn)業(yè)化程度低，綜合防制技術(shù)水平不高，PRRS的控制依賴于免疫接種，成為我國(guó)相當(dāng)長(zhǎng)一段時(shí)間內(nèi)防制PRRS所不得不面對(duì)的事實(shí)。蜂膠具有抗菌、抗病毒及增強(qiáng)機(jī)體免疫功能等作用；蜂膠顆粒能與抗原相互交聯(lián)成具有抗原“倉庫”和類免疫刺激作用的復(fù)合物結(jié)構(gòu)，可以

2、起到免疫增強(qiáng)劑的作用。為了研究PRRS疫苗的免疫效力，找到能夠控制該病的有效途徑，本次實(shí)驗(yàn)以蜂膠作為免疫佐劑，按專有技術(shù)與PRRSV融合得到PRRS蜂膠佐劑滅活疫苗，與油乳佐劑滅活苗對(duì)比進(jìn)行了研究。 1．PRRS蜂膠佐劑滅活疫苗對(duì)體液免疫水平的影響選用50日齡仔豬15頭，隨機(jī)分為3組。分別注射1倍劑量的PRRS蜂膠佐劑滅活疫苗；PRRS油乳劑滅活疫苗；等量生理鹽水。分別于注射后7 d、14 d、21 d、28 d、42 d、60

3、 d采血檢測(cè)ELISA抗體和中和抗體。結(jié)果顯示，兩組具有相似的ELISA抗體消長(zhǎng)規(guī)律，但蜂膠組所誘導(dǎo)的ELISA抗體水平一直高于油苗組；蜂膠組所誘導(dǎo)的中和抗體產(chǎn)生更迅速，水平更高。 2．PRRS蜂膠佐劑滅活疫苗對(duì)細(xì)胞免疫水平的影響分組同上。并于免疫前、免疫后7 d、14 d、28 d、42 d采集頸靜脈血，進(jìn)行外周血淋巴細(xì)胞表面CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>的流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)。結(jié)果顯示，對(duì)照組CD3<'+>、CD4

4、<'+>、CD8<'+>細(xì)胞亞群比例值在整個(gè)試驗(yàn)期基本保持不變。蜂膠組與油苗組比較，可以促使CD3<'+>細(xì)胞亞群比例值上升迅速且高峰期的數(shù)值更高。蜂膠組和油苗組的CD4<'+>細(xì)胞亞群比例值上升速度相似，在高峰期時(shí)蜂膠組的比例值明顯高于油苗組。免疫后0～7 d試驗(yàn)組CD8<'+>細(xì)胞亞群比例均呈下降趨勢(shì)，但7 d后的試驗(yàn)期內(nèi)又均呈緩慢上升趨勢(shì)，其中蜂膠組CD8<'+>細(xì)胞亞群比例值上升速度較快，且其數(shù)值遠(yuǎn)高于油苗組。 3．競(jìng)爭(zhēng)

5、性RT-PCR方法的建立及其對(duì)豬IFN-γmRNA的定量檢測(cè)無菌分離豬外周血單個(gè)核細(xì)胞，體外刺激培養(yǎng)15 h后提取細(xì)胞總RNA。采用RT-PCR技術(shù)擴(kuò)增得到435 bp的IFN-γ基因片段。將其與pMD18-T載體連接，構(gòu)建pMD-IFN435重組質(zhì)粒。然后對(duì)其進(jìn)行基因缺失，得到含有367 bp目的片段的重組質(zhì)粒pMD-IFN367，即內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)DNA模板。以定量后的pMD-IFN367與2倍梯度稀釋的pMD-IFN435進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)PCR擴(kuò)增

6、，建立了能夠準(zhǔn)確、定量檢測(cè)豬IFN-γmRNA的標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)曲線的線性回歸方程(y=0.414x-1.864)。取待測(cè)樣品按照以上步驟獲得反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，與定量后的pMD-IFN367質(zhì)粒進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)PCR擴(kuò)增。記錄pMD-IFN435與pMD-IFN367的光密度比值，結(jié)合標(biāo)準(zhǔn)競(jìng)爭(zhēng)曲線，得到待測(cè)樣品中IFN-γmRNA的含量。在免疫后至第14 d，油苗組和蜂膠組的IFN-γmRNA量比較相似，但第14 d后油苗組的上升較為緩慢；蜂膠組以較快的速度

7、迅速上升，第42 d時(shí)可達(dá)2.5632×10<'8>/μL。綜上所述，蜂膠佐劑疫苗與油佐劑疫苗比較，免疫后不僅能夠得到更高水平的ELISA抗體，更能夠有效地誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生特異性中和抗體，對(duì)機(jī)體起中和保護(hù)作用。同時(shí)，蜂膠佐劑可以更有效地刺激機(jī)體產(chǎn)生T淋巴細(xì)胞，提高細(xì)胞免疫水平。免疫后IFN-γ含量明顯增多進(jìn)一步證明了其對(duì)機(jī)體非特異性免疫能力的增強(qiáng)作用。蜂膠佐劑滅活疫苗是一種值得普及推廣的新型疫苗，這為PRRS疫苗的研究提供了新的思路。由此證