膠原微纖維體外礦化的研究.pdf

1、自然界生物礦物以其高度精細(xì)化、微型化、分等級組織、有機無機雜化以及優(yōu)異的機械性能吸引著科學(xué)家，他們致力于弄清其基本構(gòu)造單元以及合成原理，用于啟發(fā)和指導(dǎo)材料的仿生合成，使人工材料具有優(yōu)異的結(jié)構(gòu)或功能。在骨骼體系中，非膠原蛋白起著非常重要的作用，主要是捕獲礦物離子形成不定形前驅(qū)體，進(jìn)而誘導(dǎo)其在膠原中的生長，形成高度有序分等級的結(jié)構(gòu)，使骨骼具有優(yōu)異的機械性能。理解膠原微纖維礦化的機制，并用該機制來指導(dǎo)合成新穎的高性能仿生材料具有重要意義。

2、r>　　 本文采用PCR技術(shù)擴增目的基因片段，再通過酶切、連接反應(yīng)將目的基因構(gòu)建在pET-28a(+)、pMAL-p4x、pTWIN1載體質(zhì)粒上，測序結(jié)果表明三種載體均構(gòu)建正確。然后通過反向PCR在構(gòu)建好的載體質(zhì)粒上分別刪除不同序列來獲得含不同片段的目的基因，測序結(jié)果表明這些載體序列均正確。
　　 將構(gòu)建成功的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到表達(dá)型宿主細(xì)胞中，37℃搖床培養(yǎng)，當(dāng)細(xì)菌培養(yǎng)至OD6000.6～0.8時，加入IPTG(終濃度1mM)誘導(dǎo)目

3、的蛋白表達(dá)。全蛋白和純化后SDS-PAGE電泳結(jié)果表明，構(gòu)建在pET-28a(+)和pTWIN1載體上目的蛋白均沒有明顯表達(dá)跡象，構(gòu)建在pMAL-p4x載體上的pMAL-p4x-PH1也沒有明顯表達(dá)跡象，但是其余三組pMAL-p4x-HA1、pMAL-p4x-HA2和pMAL-p4x-rBSP均表達(dá)，同時重組蛋白有降解現(xiàn)象。在pMAL-p4x載體上去除信號肽后表達(dá)結(jié)果類似，仍存在降解現(xiàn)象，但是表達(dá)量增加。
　　 將涂敷重構(gòu)膠原的