雞血清丁酰膽堿酯酶分離純化與農(nóng)藥敏感性研究.pdf

1、隨著現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展,農(nóng)藥在我國(guó)糧食、水果、蔬菜的生產(chǎn)中發(fā)揮著日趨重要的作用,而農(nóng)藥不合理使用也導(dǎo)致了農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留超標(biāo),影響了人民食用安全和農(nóng)產(chǎn)品貿(mào)易。因此,簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、快速的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)技術(shù)的研究和應(yīng)用對(duì)于保障我國(guó)的食品安全具有重要意義。丁酰膽堿酯酶(Butyrylcholinesterases,BChE)活性受有機(jī)磷及氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的特異性抑制,BChE活性變化是重要的農(nóng)藥毒理學(xué)指標(biāo),可作為農(nóng)藥毒性的生物標(biāo)記物。
　

2、　本文以雞血清為研究對(duì)象,對(duì)雞血清BChE進(jìn)行分離純化,并對(duì)其基本酶學(xué)性質(zhì)進(jìn)行了研究。進(jìn)而以七種有機(jī)磷和六種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥為抑制劑,對(duì)比研究了雞血清BChE和商品化的馬血清BChE的農(nóng)藥敏感性。研究結(jié)果如下:
　　1.雞血清BChE經(jīng)DEAE Sephadex A-50離子交換和Sephacryl S-200分子篩層析后,比活力由0.0628μmol/min·mg提高到2.3689μmol/min·mg,純化37.72倍,回收率

3、為31.69％。純化后的酶除去了大量雜蛋白。
　　2.雞血清BChE的Km為60.68μmol/L,碘化硫代丁酰膽堿對(duì)該酶無(wú)過(guò)量底物抑制效應(yīng),該酶最適反應(yīng)pH為8.0,最適反應(yīng)溫度為35℃,對(duì)毒扁豆堿敏感性高,對(duì)鹽酸多奈哌齊敏感性低。
　　3.不同純度的雞血清BChE對(duì)農(nóng)藥的抑制率基本相同。
　　4.通過(guò)測(cè)定雞血清BChE和馬血清BChE對(duì)七種有機(jī)磷農(nóng)藥的IC50值,可得以下結(jié)論:
　　雞血清BChE對(duì)七種有機(jī)磷

4、農(nóng)藥的敏感性從強(qiáng)到弱依次為:速滅磷>敵百蟲(chóng)>敵敵畏>磷胺>久效磷>甲拌磷≈對(duì)硫磷;雞血清BChE對(duì)甲拌磷、對(duì)硫磷極不敏感。
　　馬血清BChE對(duì)七種有機(jī)磷農(nóng)藥的敏感性從強(qiáng)到弱依次為:速滅磷>敵百蟲(chóng)>磷胺>敵敵畏>甲拌磷>久效磷>對(duì)硫磷。
　　5.通過(guò)測(cè)定雞血清BChE和馬血清BChE對(duì)六種氨基甲酸酯類(lèi)農(nóng)藥的IC50值,可得如下結(jié)論:
　　雞血清BChE對(duì)六種農(nóng)藥的敏感性從強(qiáng)到弱依次為:涕滅威>滅多威>速滅威>克百威>異