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文檔簡介
1、磷酸化作用是一種普遍存在的蛋白質及多肽的翻譯后修飾作用,控制著細胞生長、分化、信息傳遞等多種生命活動。不正常的磷酸化作用會導致癌癥、麻風病、阿爾茨海默病等疾病。因此磷酸化肽的確認、定量檢測,以及相關激酶活性的檢測等,在生命過程的理解及疾病治療等方面具有重要意義。電化學檢測磷酸化作用常涉及兩個方面:一是通過分析激酶活性來確定磷酸化程度或篩選相關的激酶抑制劑;二是定量檢測磷酸化產(chǎn)物來分析磷酸化作用。本論文中,我們側重于磷酸化肽的定量檢測,利
2、用金屬氧化物與磷酸根基團之間的配位作用,設計了兩種電化學傳感器體系來快速準確的定量磷酸化肽,主要研究包括:
1.石墨烯-TiO2(RGO-TiO2)納米復合材料修飾電極檢測磷酸化肽
采用改進的Hummers法制備了氧化石墨烯(GO),并通過水熱法一步制備了RGO-TiO2納米復合材料,將其作為磷酸化肽(P-peptides)的捕獲界面,以鐵氰化鉀為電化學探針,建立了一種簡單靈敏無標記的電化學檢測 P-peptides
3、的方法。實驗結果表明,吸附磷酸化肽前后,峰電流發(fā)生明顯變化,而非磷酸化肽不能引起明顯變化,說明該體系在一定程度上可以用于磷酸化肽與非磷酸化肽的區(qū)分。且隨著P-peptides濃度增加,峰電流的逐漸減小。峰電流與P-peptides濃度的對數(shù),在1~500μM范圍內(nèi)存在線性關系,滿足回歸方程I=89.676-20.150x(x是對 P-peptides濃度取對數(shù)),線性系數(shù)為0.947,檢出限為0.953μM(S/N=3)。
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4、.利用競爭吸附的方法在多孔 ZrO2薄膜電極上電化學檢測磷酸化肽
通過氫氣泡模板法制備多孔 ZrO2薄膜作為 P-peptides的捕獲界面,利用ZrO2與磷酸基團之間的配位作用,P-peptides取代之前修飾電極表面吸附的電活性標記的非磷酸化肽(Fc-peptides),建立了一種競爭吸附的電化學新方法來定量檢測 P-peptides。實驗結果表明,P-peptides濃度在0.1~500μM內(nèi),降低的Fc峰電流與 P-p
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