廣西小土窩螺的核糖體DNA和線粒體基因組學研究.pdf

1、本論文的第一部分應用PCR擴增和DNA序列分析方法，以采自廣西梧州、桂林、北海、河池、南寧和百色等地的小土窩螺為研究對象，對小土窩螺核糖體基因間隔區(qū)(ITS)進行了DNA遺傳多態(tài)性及種系發(fā)育分析，以期找到小土窩螺分子分類學、種群遺傳關系研究的遺傳標記。結果表明：廣西各地區(qū)的小土窩螺ITS序列的相似性在95.7％-100％(ITS-1)及90.5％-100％(ITS-2)，而與其他椎實螺科的螺體的相似度均低于55％，這說明廣西地區(qū)的小土窩

2、螺的種內變異遠小于與其他螺的種間差異，同時也說明了ITS-1和ITS-2均可以作為種水平以上的遺傳變異標記，可以用于小土窩螺與其他椎實螺之間的鑒定。
　　 本研究的第二部分建立了小土窩螺的特異性PCR鑒定方法。以已獲得的小土窩螺ITS-1基因序列，設計了小土窩螺的特異性引物GPu/GPd，，用疑似截口土蝸、橢圓蘿卜螺等作為對照螺。采用已建立的特異性PCR檢測方法對采自梧州、桂林、南寧等六地經(jīng)過形態(tài)學鑒定的共108份小土窩螺樣品進

3、行了檢驗。敏感性試驗結果顯示最小DNA檢測量為0.12ng。本檢測方法具有特異、敏感、簡便、快捷等優(yōu)點，對小土窩螺的種類的鑒定以及對吸蟲類鑒別診斷和分子流行病學調查具有重要的應用價值。
　　 本論文的第三部分研究了小土窩螺的線粒體rrnL基因和線粒體全基因組。第一節(jié)對廣西地區(qū)不同種群的小土窩螺線粒體的rrnL基因部分序列進行PCR擴增、SSCP分析、測序及分析，結果得到有效長度為273bp的prrnL序列，其種群間變異為0-4.

4、9％。而種系發(fā)育分析顯示不能將小土窩螺不同的種群區(qū)分開來，說明其不適合作為小土窩螺的種群遺傳標記。
　　 第二節(jié)完成了小土窩螺的線粒體全基因組序列測定及分析。在比較和分析肺腮亞綱的線粒體全基因組序列之后，利用coxl，rrnL，cox3，nadl和cytb共5個線粒體DNA小片段設計引物，采用長PCR方法分別擴增出長度約2-7kb的5個有重疊序列的片段，經(jīng)克隆轉化和測序后獲得小土窩螺線粒體基因組的全序列，并對其結構特點及遺傳進化

5、關系進行分析。結果顯示：小土窩螺的線粒體基因組全長為13768bp，A+T含量為72.67％;小土窩螺線粒體全基因組由13個蛋白質基因、2個rRNA基因、22個tRNA基因組成。小土窩螺的線粒體全基因組中存在較多的小片段重疊區(qū)和基因間隔區(qū)。蛋白編碼基因排序方式與已報道線粒體全基因組的基眼目、柄眼目的螺種完全一致，與柄眼目的螺種Albinariacoerulea僅是cox3和nad4基因位置顛倒，其他蛋白編碼基因排列方式完全一致。在13個

6、編碼蛋白質的基因中，以ATG和ATA作為蛋白質翻譯的起始密碼子；多數(shù)蛋白質翻譯的終止密碼子為TAA，其次是TAG。
　　 以釘螺為外群，以線粒體DNA序列作為遺傳標記，重構了小土窩螺的系統(tǒng)發(fā)育關系。結果顯示：小土窩螺單獨成一分支，與扁卷螺關系最近。
　　 本論文首次研究了小土窩螺的ITS及線粒體全基因組序列，研究結果不僅豐富了腹足綱螺類的ITS及線粒體全基因組序列，同時為對吸蟲中間宿主螺類的遺傳進化等方面的進一步研究奠定