基于轉(zhuǎn)錄水平生物標(biāo)志物監(jiān)測肉羊肌肉中β2受體激動劑的研究.pdf

1、畜牧業(yè)中β2受體激動劑的濫用一直是國內(nèi)外關(guān)注的熱點(diǎn)，目前雖然己經(jīng)建立了很多檢測藥物殘留的方法，但是新藥及逃逸藥物仍然是當(dāng)前監(jiān)測的難題，因此有必要建立更為高效的方法。β2受體激動劑有共同的作用機(jī)理，研究β2受體激動劑在分子水平對生理的影響，如對基因轉(zhuǎn)錄水平的定量是一個建立該篩查方法的新方向。本論文即從尋找β2受體激動劑轉(zhuǎn)錄水平生物標(biāo)志物著手，通過篩查模型的初步建立、方法學(xué)驗(yàn)證、模型優(yōu)化、樣品驗(yàn)證等途徑，擬找到長效、穩(wěn)定、高效的生物標(biāo)志物并

2、建立監(jiān)測模型，以期為實(shí)現(xiàn)當(dāng)前對該類藥物的有效監(jiān)測提供參考，主要研究內(nèi)容與結(jié)果如下：
　?。?）基于靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)檢測β2受體激動劑方法的建立。結(jié)果顯示，基于文獻(xiàn)尋找基因表達(dá)水平的生物標(biāo)志物不僅以區(qū)分實(shí)驗(yàn)組和對照組樣品，還可對實(shí)驗(yàn)組樣品的殘留水平進(jìn)行界定。qRT-PCR結(jié)果表明萊克多巴胺可以影響所選9個候選基因的表達(dá)量，主成分分析、聚類分析和判別分析結(jié)果表明，該組基因可以作為確定山羊非法使用β2受體激動劑的生物標(biāo)志物。對所有樣品殘留量

3、進(jìn)行測定，并與qRT-PCR結(jié)果建立模型得到殘留量預(yù)測值，結(jié)果顯示殘留量預(yù)測值與實(shí)際值相關(guān)性良好，表明該組基因表達(dá)量變化特異于藥物處理。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析表明該組基因還可以區(qū)分不同殘留水平的實(shí)驗(yàn)組樣品。
　?。?）結(jié)合非靶向轉(zhuǎn)錄組學(xué)檢測β2受體激動劑方法的建立及優(yōu)化。結(jié)果顯示，結(jié)合非靶向組學(xué)方法即RNA高通量測序篩選的8個基因共17個基因的PCA、HCA和DA結(jié)果與基于文獻(xiàn)所選的9個基因結(jié)果相比有改善，顯示了RNA高通量測序技術(shù)在篩選目的

4、基因方面的巨大潛力，進(jìn)一步說明基于文獻(xiàn)的靶向方法與非靶向方法相結(jié)合是尋找潛在基因表達(dá)水平生物標(biāo)志物的一個理想方法。進(jìn)一步通過VIP值從17個基因中篩選關(guān)鍵6個基因結(jié)果與上述17個基因結(jié)果一致，說明所選6個基因?qū)δＰ陀绊戯@著，有利于實(shí)際操作中減少操作時間和操作量，對以后的實(shí)際應(yīng)用有重要意義。
　?。?）方法應(yīng)用及驗(yàn)證。結(jié)果顯示，所選6個基因?qū)?5個待檢樣品預(yù)判結(jié)果正確，進(jìn)一步驗(yàn)證了方法的正確性和有效性。另外，實(shí)驗(yàn)中僅用萊克多巴胺處理