人羊膜臍帶源性間充質(zhì)干細胞對大鼠肝硬化的治療作用.pdf

1、目的：
　　 比較人臍帶間充質(zhì)干細胞和人羊膜間充質(zhì)干細胞對模型大鼠肝硬化的治療效果。
　　 方法：
　　 體外分離培養(yǎng)人臍帶間充質(zhì)干細胞和人羊膜間充質(zhì)干細胞,流式細胞儀檢測hUC-MSCs和hAM-MSCs的表面標志。用四氯化碳誘導大鼠肝硬化模型,在第8周時,殺死5只大鼠做病理檢測以確診為肝硬化。30只成模大鼠隨機分為臍帶干細胞組(n=10)、羊膜干細胞組(n=10)和對照組(n=10),分別注入人臍帶間充質(zhì)干細

2、胞、人羊膜間充質(zhì)干細胞2ml(細胞數(shù)量2×106)和等量生理鹽水。細胞移植前和移植4周后,分別從心臟采血檢測天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、白蛋白(ALB)及總膽紅素(TBIL)的水平;之后取肝組織制備切片進行HE染色、Masson染色;免疫組化法檢測α-SMA在肝臟中的表達。
　　 結果：
　　 1.用組織塊貼壁法分離培養(yǎng)臍帶間充質(zhì)干細胞,培養(yǎng)7d左右,大量細胞從組織塊中游出并貼壁,一周后,

3、多數(shù)細胞呈長梭形或扁平形的成纖維樣細胞,圍繞組織塊呈漩渦狀或平行狀生長。用胰酶.膠原酶二酶消化法消化羊膜,原代細胞在24-48h后細胞開始貼壁生長,細胞呈圓形和典型的短梭形。臍帶MSCs和羊膜MSCs的細胞免疫表型顯示表達CD44,CD29,不表達CD34.
　　 2.大鼠血清中ALT、AST、ALB和TBIL含量檢測發(fā)現(xiàn),移植4周后,臍帶干細胞組和羊膜干細胞組的肝功能(ALT、AST)較對照組有明顯改善(ALT:204.6±1

4、6.4 U/L,195.6±21.2 U/Lvs539.8±36.2 U/L;AST180.1±25.2 U/L,167.5±19.0 U/Lvs337.4±23.4 U/L,均P＜0.05)。
　　 3.HE染色見細胞移植后肝臟切片內(nèi)肝細胞變性、壞死有所減輕,匯管區(qū)炎癥細胞浸潤減輕。Masson染色顯示,細胞移植后大鼠肝組織內(nèi)假小葉數(shù)量減少,膠原纖維明顯少于對照組。
　　 4.臍帶干細胞組和羊膜干細胞組α-SMA陽性細

5、胞的百分比減少,與對照組相比α-SMA表達差異有統(tǒng)計學意義(130.6±3.0,127.0±2.6vs152.2±5.4,均P＜0.05)。
　　 5.臍帶干細胞組和羊膜干細胞組的肝功能、肝組織病理學評分及肝臟α-SMA表達量均無明顯差異。
　　 結論：
　　 1.本研究分別用組織塊貼壁法和胰酶.膠原酶二酶消化法分離培養(yǎng)人臍帶MSCs和人羊膜MSCs,兩種細胞的形態(tài)及免疫表型與骨髓MSCs一致。
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