茅蒼術同源四倍體離體誘導與鑒定及其遺傳變異研究.pdf

1、本研究在建立茅蒼術無菌快繁技術體系的基礎上，采用秋水仙素進行離體誘導，多種鑒定手段相結合，篩選出了茅蒼術同源四倍體株系，并對其親本和同源四倍體的遺傳差異進行了研究，具體內容及研究成果如下:
　　1.本試驗以野生茅蒼術的新鮮種子為試驗材料，用0.1％的HgCl2消毒后建立無菌系，采用正交設計法對茅蒼術的增殖體系及生根培養(yǎng)基進行優(yōu)化，并對試管苗移栽基質進行篩選。建立的最適消毒方法為:種子在75％的酒精中消毒30s后轉入0.1％的HgC

2、l2浸泡4min，種子發(fā)芽率達87％;茅蒼術無菌系在MS+6-BA2.0 mg.L-1+ NAA0.2mg.L-1的培養(yǎng)基中擴繁最好，30d的平均增殖系數(shù)達9.2±1.1;在1/2MS+ NAA0.2mg.L-1的培養(yǎng)基中生均生根率為82.6％左右，且根粗，移栽易成活;試管苗在蛭石基質中成活率達到91％左右，長勢最好。本研究建立的茅蒼術種苗快繁技術體系，為茅蒼術同源四倍體的離體誘導奠定了實驗基礎。
　　2.以茅蒼術試管苗幼芽為外植

3、體進行四倍體的離體誘導，采用形態(tài)鑒別、氣孔觀察、根尖染色體壓片和流式細胞術分析相結合的方法進行同源四倍體的鑒定。發(fā)現(xiàn)用0.2％的秋水仙素處理12h為誘導茅蒼術同源四倍體的理想條件，四倍體誘導率達36％。經秋水仙素誘變后的疑似四倍體與二倍體在葉面積指數(shù)、葉長、葉寬等葉片的形態(tài)指標及保衛(wèi)細胞葉綠體數(shù)、氣孔大小、氣孔密度等方面均存在顯著差異。本試驗共獲得了23個茅蒼術同源四倍體株系，為進一步開展茅蒼術同源四倍體的遺傳機理研究提供實驗材料。

4、r>　　3.以茅蒼術二倍體和四倍體的試管苗為試驗材料，采用MSAP技術研究其基因組DNA甲基化水平及模式變化。本試驗選用20對選擴引物，在茅蒼術二倍體和同源四倍體中檢測到的基因位點數(shù)分別為520和527，其相應的擴增總甲基化率為56.92％和55.03％，四倍體基因組DNA全甲基化率低于二倍體，而半甲基化率高于二倍體;茅蒼術四倍體DNA甲基化模式發(fā)生調整的基因位點占總檢測位點的52.53％。本研究為深入揭示四倍體茅蒼術的表觀遺傳調控機制