ATF4參與TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)并正相調(diào)節(jié)TLR誘導(dǎo)的細(xì)胞因子分泌.pdf

1、目的：免疫系統(tǒng)是機(jī)體抵御外來(lái)病原體侵襲的主要武器，由天然免疫系統(tǒng)和獲得性免疫系統(tǒng)兩個(gè)相互作用的子系統(tǒng)組成。不同于獲得性免疫系統(tǒng)，天然免疫系統(tǒng)利用未經(jīng)重排的受體來(lái)識(shí)別病原體，誘導(dǎo)炎性細(xì)胞因子的分泌和共刺激分子的表達(dá)，從而激活獲得性免疫系統(tǒng)。天然免疫系統(tǒng)的激活依賴于其受體系統(tǒng)，特別是TLR受體家族。對(duì)于TLR激活后如何誘導(dǎo)下游分子的活化是當(dāng)前免疫學(xué)的研究熱點(diǎn)之一。ATF4是重要的轉(zhuǎn)錄因子，參與多個(gè)生理過(guò)程。迄今為止，該分子在TLR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)

2、程中的作用尚未被明確。研究本項(xiàng)目將探討這一問(wèn)題。
　　 方法：首先利用免疫熒光的方法觀察ATF4向核內(nèi)轉(zhuǎn)移和western blot檢測(cè)TLR4是否激活A(yù)TF4；其次，在THP-1細(xì)胞中沉默ATF4基因來(lái)觀察ATF4如何影響TLR4誘導(dǎo)的IL-6，IL-8等細(xì)胞因子和細(xì)胞趨化因子的分泌；再次，在THP-1細(xì)胞中沉默TLR4下游兩個(gè)重要基因MyD88和TRIF，以及利用磷酸激酶抑制劑來(lái)探討TLR激活A(yù)TF4的分子機(jī)制。
　　

3、 結(jié)果：細(xì)胞免疫熒光和western blot檢測(cè)到ATF4在LPS刺激后有極化和入核現(xiàn)象；在THP-1細(xì)胞中沉默ATF4后會(huì)減少IL-6，IL-8，RANTES等細(xì)胞因子的分泌；分別沉默TLR4下游兩個(gè)重要接頭分子MyD88和TRIF檢測(cè)ATF4活化機(jī)制，ATF4通過(guò)MyD88通路被活化，ATF4入核需要MyD88參與；采用激酶抑制劑的方法探討其中的分子機(jī)制發(fā)現(xiàn)，JNK inhibitorⅡ和PI3K inhibitor預(yù)處理的細(xì)胞