去甲腎上腺素調(diào)控脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達及機制研究.pdf

1、目的：
　　動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥性疾病，不穩(wěn)定粥樣硬化斑塊的破裂導(dǎo)致血栓形成及急性冠脈綜合癥的發(fā)生。基質(zhì)金屬蛋白-9可以降解細胞外基質(zhì)，研究表明，基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達分泌失衡，與粥樣斑塊的不穩(wěn)定密切相關(guān)。脂多糖與去甲腎上腺素均可參與粥樣斑塊的病理發(fā)展過程。但脂多糖與去甲腎上腺素如何調(diào)控基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達及相關(guān)的機制仍不清楚。我們的研究目的是探討去甲腎上腺素與脂多糖，這兩種與動脈粥樣硬化相關(guān)的因子，對于基質(zhì)金屬蛋白酶-

2、9表達的調(diào)控及機制。
　　方法：
　　單核細胞參與粥樣硬化斑塊的病理進程。我們利用單核細胞系THP-1以及THP-1誘導(dǎo)分化來的巨噬細胞測定去甲腎上腺素與LPS對基質(zhì)金屬蛋白酶-9表達的影響。主要研究方法包括:
　　1.利用實時定量PCR檢測基質(zhì)金屬蛋白酶，基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1mRNA在單核細胞的表達情況。
　　2.利用Elisa測定細胞上清中基質(zhì)金屬蛋白酶-9以及基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的表達。

3、
　　3.利用明膠酶譜方法測定THP-1以及THP-1誘導(dǎo)而來的巨噬細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9的明膠降解活性。
　　4.Western Blot實驗研究去甲腎上腺素與脂多糖對基質(zhì)金屬蛋白酶-9分泌相關(guān)信號通路的調(diào)控。
　　5.通過應(yīng)用腎上腺素受體抑制劑，MAPK通路抑制劑以及C-FOS siRNA等干預(yù)手段來闡明具體的機制。
　　結(jié)果：
　　1.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的THP-1細胞基質(zhì)金屬蛋白酶-9/

4、基質(zhì)金屬蛋白酶內(nèi)源性抑制劑-1的mRNA以及蛋白表達。
　　2.在THP-1及THP-1誘導(dǎo)的巨噬細胞，去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的酶活性。
　　3.Beta腎上腺素受體抑制劑普萘洛爾預(yù)處理可以抑制去甲腎上腺素/脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的表達，而alpha腎上腺素受體抑制劑酚妥拉明則沒有作用。
　　4.去甲腎上腺素上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的單核細胞ERK，JNK的磷酸化水平，并抑制P38的激活。ER

5、K，JNK抑制劑抑制了去甲腎上腺素和脂多糖介導(dǎo)的基質(zhì)金屬蛋白酶-9的分泌及酶活性。
　　5.去甲腎上腺素可以上調(diào)LPS介導(dǎo)的C-FOS的表達。這種作用可以被ERK，JNK的抑制劑以及普萘洛爾所逆轉(zhuǎn)。C-FOS敲低后，去甲腎上腺素/LPS介導(dǎo)的MMP-9的酶活性上調(diào)被抑制。
　　6.去甲腎上腺素可以上調(diào)脂多糖介導(dǎo)的C-JUN的磷酸化水平。
　　結(jié)論：
　　1.去甲腎上腺素可以增強脂多糖介導(dǎo)的單核細胞與巨噬細胞基質(zhì)金