炔苯酰草胺降解菌的分離鑒定及酰胺水解酶基因的克隆與表達(dá).pdf

1、炔苯酰草胺是1969年美國(guó)羅門(mén)哈斯公司(Rohm& Haas)開(kāi)發(fā)的一種芽后處理的內(nèi)吸傳導(dǎo)型選擇性苯甲酰胺類(lèi)除草劑，適用作物為苜蓿、大豆、豌豆、萵苣、棉花、向日葵等，對(duì)一年生、多年生雜草和某些闊葉雜草有很好的抑制和鏟除效果。因?yàn)槿脖锦２莅烦莼钚愿哂謱?duì)哺乳動(dòng)物低毒，所以被廣泛使用。但是過(guò)度、頻繁的使用炔苯酰草胺，引起了一些環(huán)境問(wèn)題。因此，尋求能夠把炔苯酰草胺殘留從環(huán)境中消除的有效策略是很有必要的。生物降解被認(rèn)為是消除環(huán)境中污染物的主要因

2、素。目前已經(jīng)分離到了許多能夠降解有機(jī)污染物的微生物，但是關(guān)于炔苯酰草胺的降解菌的研究未見(jiàn)報(bào)道.
　　本研究從長(zhǎng)期受農(nóng)藥污染的土壤中分離出能夠快速降炔苯酰草胺的菌株W1，根據(jù)表型特性、生理生化特征和16S rDNA系統(tǒng)發(fā)育分析，將其鑒定為睪丸酮叢毛單胞菌(Comamonas testosteroni)。菌株W1最適生長(zhǎng)溫度和pH分別30℃和7.0，為好氧性生長(zhǎng)，當(dāng)NaCl濃度小于2％時(shí)，菌體生長(zhǎng)良好。
　　鑒定了菌株W1代謝炔

3、苯酰草胺的中間產(chǎn)物為3，5-二氯苯甲酸，即該菌株降解炔苯酰草胺是依靠斷裂酰胺鍵來(lái)實(shí)現(xiàn)的，而且它能進(jìn)一步降解3，5-二氯苯甲酸。菌株W1其降解炔苯酰草胺的最適溫度和pH分別為30℃和7.0。在該條件下，5％接種量的菌株W1在18 h內(nèi)可將80 mg L-1的炔苯酰草胺降解99％以上。但是該菌株不能降解包括敵稗、敵草隆、異丙隆、滅草隆、甲草胺、乙草胺、丙草胺、丁草胺在內(nèi)的酰胺類(lèi)除草劑。
　　由于3,5-二氯苯甲酸的水溶性比炔苯酰草胺的

4、水溶性高，所以當(dāng)炔苯酰草胺被轉(zhuǎn)化成3，5二氯苯甲酸時(shí)，在含有300 mg L-1炔苯酰草胺的LB平板上會(huì)形成透明的水解圈。以此作為篩選標(biāo)記，從W1的基因組文庫(kù)中克隆出一個(gè)新的酰胺水解酶的基因camH，該基因大小為1452 bp，編碼483個(gè)氨基酸，G+C含量為49.30％。camH基因序列的Blast比對(duì)顯示，在氨基酸水平上與推測(cè)的酰胺酶最高相似性為41％?；盍ξ稽c(diǎn)分析發(fā)現(xiàn)CamH具有酰胺酶特征家族的保守的Lys-Ser-Ser催化中心