氫溴酸常山酮抗柔嫩艾美耳球蟲作用研究.pdf

1、球蟲病是由頂復門細胞內(nèi)寄生性原蟲——艾美耳球蟲引起的一種雞腸道寄生蟲病。球蟲病對養(yǎng)雞業(yè)危害非常嚴重，因死亡率較高，病愈雞飼料報酬下降、生長緩慢、產(chǎn)蛋率下降以及防治用的藥物和疫苗的使用等原因，每年給世界養(yǎng)禽業(yè)造成約三十億美元的經(jīng)濟損失。目前，使用化學藥物防治是控制雞球蟲病的主要策略。化學藥物能夠預防該病的爆發(fā)，但亞臨床感染相當普遍，而且球蟲非常容易產(chǎn)生耐藥性，新藥研制費時費力，遠遠跟不上耐藥性產(chǎn)生的速度。目前國內(nèi)外許多學者在篩選各種抗球蟲

2、藥物，但一直沒有令人滿意的結(jié)果。因此，從現(xiàn)有的藥物入手，在研究其作用機理的基礎(chǔ)上再進行新藥的研發(fā)，或許是一條好的途徑。氫溴酸常山酮自上個世紀三十年代以來就一直在使用，但對于其作用機理的研究卻相對較少，對其作用的靶點不甚明了。因此，我們對氫溴酸常山酮抗柔嫩艾美耳球蟲的作用開展了研究.
　　 一、華東部分地區(qū)肉雞球蟲病的流行病學調(diào)查
　　 為了了解華東地區(qū)肉雞球蟲病的流行情況，更好地為雞球蟲病的防治提供科學的依據(jù)，本項目組成

3、員2011年3、4月份采集了來自華東地區(qū)的浙江省、江蘇省、上海市、安徽省、山東省、江西省的養(yǎng)雞場的429份雞糞樣品，進行了球蟲卵囊的分離與鑒定.結(jié)果表明，有116份陽性樣品，多數(shù)樣品為兩三種球蟲的混合感染，六省市球蟲病平均感染率為27.1％，江西、上海、山東、江蘇四省市的球蟲病感染率為30.0％～43.3％，高于平均水平。經(jīng)單卵囊繁殖和多重PCR鑒定表明，上述六省市主要流行的球蟲種類有四種，即巨型艾美耳球蟲、柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球

4、蟲和堆型艾美耳球蟲.
　　 二、氫溴酸常山酮的抗球蟲效果研究
　　 氫溴酸常山酮是一類化學合成的高效廣譜抗球蟲藥物，為了驗證該產(chǎn)品對雞球蟲的作用效果，進行了本試驗.本試驗對14日齡雞進行人工感染柔嫩艾美耳球蟲，并用1.5 mg/kg、3 mg/kg和6 mg/kg三種濃度的氫溴酸常山酮進行治療.結(jié)果表明，與陽性對照組相比，1.5 mg/kg、3 mg/kg可以使球蟲感染雞的體重顯著提高。隨著藥物濃度增加，沒有觀察到血便排

5、出，沒有觀察到盲腸病變，但卵囊排出量和體重相對增重率都呈下降趨勢。3 mg/kg氫溴酸常山酮抗球蟲指數(shù)高達195.45，表明該氫溴酸常山酮具有高效抗球蟲效果。
　　 三、氫溴酸常山酮的安全性評價
　　 本實驗以高于使用劑量1-3倍連續(xù)3周給藥，通過雞的增重情況、血液學與血液化學指標及組織病理學檢查，評價了氫溴酸常山酮對雞的安全性。實驗結(jié)果表明，各實驗組與對照組的血液化學指標和血液學指標無顯著差異，尸體解剖未見各組織器官有

6、明顯的異常變化，組織學檢查也未見有病理變化，說明氫溴酸常山酮對雞只比較安全。
　　 四、氫溴酸常山酮的體內(nèi)作用機理研究
　　 氫溴酸常山酮作為抗球蟲藥已有多年的使用歷史，但是人們對其作用的機理卻了解不多。為了研究其作用機理，本研究中分別對人工感染柔嫩艾美耳球蟲后0、1、2、3、4、5、6天的雞用3 mg/kg飼料的氫溴酸常山酮進行治療（相應的分別為第0、1、2、3、4、5、6組），觀察不同給藥時間的抗球蟲效果。第7組的雞

7、只感染柔嫩艾美耳球蟲而不治療，作為感染對照組，第8組的雞不感染不治療，作為陰性對照組.感染后觀察記錄各組雞的死亡率、體重增重率、卵囊下降率和盲腸病變記分，并且采集盲腸組織制備組織切片，綜合評價氫溴酸常山酮的作用效果，初步探索其作用機理。實驗結(jié)果表明，感染的當天或者感染后2天之內(nèi)用氫溴酸常山酮治療是完全有效的，如果感染2天后再用氫溴酸常山酮治療只能起到部分保護效果或無保護效果.盲腸的組織切片觀察表明，氫溴酸常山酮可以抑制柔嫩艾美耳球蟲子孢

8、子的入侵，氫溴酸常山酮治療組的第二代裂殖體表現(xiàn)出空泡化和降解.因此，氫溴酸常山酮主要作用于球蟲生活史的早期，阻止其入侵宿主細胞，然后通過抑制裂殖體分裂為裂殖子，使裂殖體空泡化達到破壞其發(fā)育的作用效果，導致裂殖體和裂殖子發(fā)育被抑制，發(fā)育速度減慢，從而被機體的免疫系統(tǒng)清除.
　　 五、氫溴酸常山酮的體外作用機理研究
　　 為了探索氫溴酸常山酮的體外作用機理，本實驗對獲得的新鮮的未孢子化柔嫩艾美耳球蟲卵囊通過孢子化不同時間后給

9、予氫溴酸常山酮孵育處理，再繼續(xù)進行孢子化，觀察了氫溴酸常山酮在體外條件下對孢子化的影響、卵囊的外觀形態(tài)和超微結(jié)構(gòu)的變化及部分有代表性關(guān)鍵基因的表達情況，并研究了子孢子體外處理后對細胞感染能力的影響.結(jié)果表明，氫溴酸常山酮可以抑制孢子生殖，使卵囊孢子化率降低，并且藥物處理后的卵囊脫孢子囊能力下降，卵囊表面形態(tài)和細胞質(zhì)及其超微結(jié)構(gòu)等都發(fā)生明顯異常，而且子孢子與氫溴酸常山酮體外條件下共孵育后對細胞的感染能力下降.根據(jù)結(jié)果推測，氫溴酸常山酮可能

10、對卵囊壁的結(jié)構(gòu)具有破壞作用.對多個基因的表達情況分析表明，氫溴酸常山酮作用后，丙醇酸激酶基因的表達下調(diào)，而1-磷酸甘露醇脫氫酶、微線體蛋白1和熱激蛋白90基因表達上調(diào)。
　　 綜上所述，本研究對華東地區(qū)部分省市的雞球蟲病進行了流行病學調(diào)查，并用形態(tài)學方法和多重PCR方法對分離到的卵囊進行了蟲種的鑒定;對氫溴酸常山酮進行了抗球蟲效果實驗及對雞的安全性實驗，并通過氫溴酸常山酮在球蟲感染雞體后不同時間給藥探討了抗柔嫩艾美耳球蟲的作用機