PD1-PDL1和CD28-CD80信號途徑對慢性HBV感染后NKT細胞功能的影響.pdf

1、目的：α-半乳糖神經(jīng)酰胺(α-GalCer)活化的NKT細胞可以抑制HBV的感染，但是α-GalCer也很容易誘導NKT細胞的無能，通過對CD28/CD80與PD1/PDL1第二信號通路進行干預，打破α-GalCer誘導的NKT細胞無能以恢復甚至加強NKT細胞功能來抑制乙肝病毒的復制。
　　方法：分離小鼠肝臟單個核細胞，檢測肝臟NKT細胞PD1、CD28的表達及IFN-γ、IL-4的分泌功能；加入α-GalCer，anti-CD2

2、8/anti-CD80活化抗體和anti-PDL1阻斷抗體共同培養(yǎng)單個核細胞72小時后利用流式細胞儀檢測技術檢測NKT細胞IFN-γ和IL-4的分泌功能；同時用ELISA方法檢測細胞培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-4細胞因子的含量。將α-GalCer，anti-CD28/anti-CD80活化抗體和anti-PDL1阻斷抗體經(jīng)尾靜脈注入HBV轉基因小鼠體內(nèi)，3天后用化學發(fā)光發(fā)測量血清中HBsAg和HBeAg的表達，用熒光定量PCR檢測DN

3、A的含量；用流式細胞儀檢測技術檢測處理后的小鼠肝臟中NKT細胞PD1、CD28的表達及IFN-γ、IL-4的分泌功能。同時用H&E染色觀察肝臟的組織學變化。
　　結果：與同品系正常健康小鼠比較，HBV轉基因小鼠肝臟NKT細胞的頻率明顯下降(P<0.05)，NKT細胞表面PD1的表達明顯增多(P<0.05)，CD28的表達明顯減少(P<0.05)IFN-γ和IL-4的分泌功能明顯降低(P<0.05)；在α-GalCer激活的條件下，

4、通過阻斷PD1/PDL1和(或)提升活化CD28/CD80途徑后，NKT細胞內(nèi)IFN-γ的分泌明顯增多，IL-4變化不大；HBV受到明顯的抑制，同時肝臟出現(xiàn)相應的炎癥，但值得注意的是：提升活化CD28/CD80途徑對HBV的抑制最明顯而且對肝組織的損傷最小。
　　結論：通過提升活化CD28/CD80途徑，可明顯改善α-GalCer誘導的NKT細胞功能以抑制乙肝病毒的復制，而且只有輕微的肝組織損傷，這可能為臨床深化抗乙肝病毒的免疫干