大鼠骨髓間充質干細胞移植誘導肝移植免疫耐受的研究.pdf

1、目的：通過觀察不同處理因素對大鼠肝移植術后大鼠生存時間的影響，探討骨髓間充質干細胞移植聯合亞劑量FK506誘導肝移植術后免疫耐受的可行性及其可能機制。 材料和方法：首先建立穩(wěn)定可靠的大鼠原位肝移植動物模型。選用雄性SD大鼠160只，分為供體組和受體組。應用改良“二袖套法”進行大鼠原位肝移植，通過熟練的顯微外科技術操作，縮短無肝期時間，并結合多項改良措施，保障手術成功。 取大鼠骨髓，分離、純化，體外擴增骨髓MSC至第三代，

2、并行CFDA標記。標記的大鼠MSC行門脈注射，7d后進行連續(xù)切片，DAPI染色并在熒光顯微鏡下觀察大鼠MSC歸巢情況。 采用近交系雌性Lewis大鼠和雌性BN大鼠共64只，LEWIS為供體(n=32)，BN為受體(n=32)，制作原位肝移植大鼠模型32只，分為4組。A組：受體肝在移植后于門靜脈注射1mL生理鹽水；B組：受體肝在移植后于門靜脈注射2×106MSCs；C組：受體肝在移植后于門靜脈注射1mL生理鹽水，給予治療劑量FK5

3、06(0.5mg/kg·d-1)；D組：受體肝在移植后于門靜脈注射2×106MSC，同時給予亞治療劑量FK506(0.125mg/kg·d-1)。全程觀察動物全身情況，記錄存活時間，監(jiān)測術后14d血清谷丙氨酸氨基轉移酶(ALT)、總膽紅素(TBIL)濃度水平，以及移植肝臟的病理變化；PCR半定量檢測血液SRY；流式細胞學檢測BN大鼠脾臟HIS19抗體，評估嵌合體的形成情況。 結果：聯合MSC移植和亞治療劑量FK506組生存時間(

4、52.8±4.1)d明顯長于生理鹽水對照組(12.5±0.8)d和單純MSC注射組(12.7±1.2)d，與免疫抑制劑組(47.8±3.8)d相當，其病理評分依據Banff方案也較生理鹽水對照組[重度(Ⅲ級)]和單純MSC注射組[中度(Ⅱ級)]明顯降低，為輕度(Ⅰ級)。聯合MSC移植和亞治療劑量FK506組受體脾細胞中HIS19陽性細胞含量達(13.0±2.5)％，較生理鹽水對照組(0.4±0.5)％、單純MSCs注射組(0.5±0.3

5、)％和治療劑量FK506注射組(1.4±0.9)％顯著增多(P<0.01)。另外，聯合MSC移植和亞治療劑量FK506組、治療劑量FK506注射組ALT水平分別為(49.48±9.70)U/L和(54.3±11)U/L，較生理鹽水對照組[(886.81±90.3)U/L]和單純MSC注射組[(869.7±109)U/L]顯著降低(P<0.01)：聯合MSC移植和亞治療劑量FK506組、治療劑量FK506注射組TBIL濃度分別為(13.5