穿膜肽介導納米銀抗腫瘤應用的初步研究.pdf

1、目的:探索并驗證納米銀(Silver Nanoparticles,AgNP)的抗腫瘤活性,為惡性腫瘤的治療尋找新的行之有效的方法。目前,已有研究證實納米銀的體外抗腫瘤活性,尤其是粒徑在10 nm以下的納米銀粒子的抗腫瘤效果尤為明顯。
　　 方法:利用化學還原法制備納米銀,通過單因素實驗優(yōu)化制備條件,為了改善納米銀穿過細胞膜的能力,在納米銀表面修飾穿膜肽(TAT),制備得到經過TAT修飾的納米銀粒子(AgNP-TAT)。采用激光納

2、米粒度儀測定AgNP及AgNP-TAT的粒徑和電位;用透射電子顯微鏡考察AgNP及AgNP-TAT的形態(tài)及分散均勻度;使用熱重分析儀和二奎琳甲酸法對連接到納米銀表面的TAT進行定性和定量分析;使用激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀考察細胞對AgNP及AgNP-TAT的攝取效率;使用MTT法考察AgNP及AgNP-TAT對腫瘤細胞和正常細胞的增殖抑制效果;最后用nu/nu裸鼠的黑色素瘤模型考察AgNP及AgNP-TAT對黑色素瘤的抑制效果,并通

3、過給健康nu/nu裸鼠后肢肌肉局部注射AgNP及AgNP-TAT考察AgNP及AgNP-TAT的局部刺激性。在所有的細胞及動物實驗中均采用鹽酸鹽阿霉素作為陽性對照。
　　 結果:影響納米銀粒徑的因素主要有:硝酸銀和硼氫化鈉的比例以及表面活性劑聚乙烯吡咯烷酮k-30的用量,制備過程中的攪拌速度,攪拌時間等。通過處方優(yōu)化最終制備出了粒徑10 nm以下的納米銀,并通過Ag-S共價鍵在納米銀表面修飾上了TAT。細胞實驗結果顯示,AgNP

4、及AgNP-TAT對多種腫瘤細胞的增殖都有一定的抑制作用,且AgNP-TAT的抑制效果顯著強于AgNP,但是兩者均對非腫瘤細胞系293-T細胞基本沒有毒性。動物實驗結果顯示,AgNP-TAT對裸鼠黑色素腫瘤的抑制率達到90％,且與ADR相比其毒副作用明顯降低。
　　 結論:本研究制備的粒徑10 nm以下的納米銀體內體外實驗均表明有較強的抗腫瘤效果,且修飾TAT后其抗腫瘤效果得到了明顯的提高,AgNP-TAT的體內體外實驗均表現(xiàn)出