廣西巴馬小型豬白細(xì)胞介素-2和γ-干擾素的克隆與原核表達(dá).pdf

1、廣西大學(xué)碩士學(xué)位論文廣西巴馬小型豬白細(xì)胞介素2和γ干擾素的克隆與原核表達(dá)姓名：韋祖樟申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：黃偉堅(jiān)羅廷榮20050601廣西巴馬小型豬白細(xì)胞介素一2和Y一干擾素的克隆與原核表達(dá)摘要豬白細(xì)胞介素一2(IL2)和Y一干擾素(IFNY)是豬體內(nèi)重要的細(xì)胞因子，在豬抗病和免疫應(yīng)答反應(yīng)中占有重要地位。本實(shí)驗(yàn)將廣西巴馬小型豬外周血淋巴細(xì)胞在刀豆球蛋白A(ConA)的刺激下體外培養(yǎng)15h后，提取激活的淋巴細(xì)胞總RN

2、A，應(yīng)用RT—PCR技術(shù)擴(kuò)增出豬IL2cDNA年I：]lFNYcDNA，克隆YIJpMDl8T載體上并測(cè)序。測(cè)序結(jié)果顯示：克隆的lL一2cDNA全長(zhǎng)為513個(gè)堿基，開放閱讀框(ORF)為465個(gè)堿基，編碼154個(gè)氨基酸與報(bào)道其它品種豬的IL2同源性為100％?？寺〉牡腎FN—YcDNA全長(zhǎng)為556個(gè)堿基，開閱讀框(ORF)為501個(gè)堿基，編碼166個(gè)氨基酸。與報(bào)道其它品種豬的lFNY同源性為100％。證實(shí)克隆到了巴馬小型豬lL2基因和I

3、FNY基因的cDNA為了亞克隆編碼豬lL2；fllFN—Y成熟蛋白基因，設(shè)計(jì)兩對(duì)引物。擴(kuò)增產(chǎn)物分別命名mlL2豐l：lmIFNY。為了檢測(cè)目的蛋白的表達(dá)，設(shè)計(jì)另外兩對(duì)引物，使這兩對(duì)引物帶上21個(gè)核苷酸組成的血凝素序列，可以通過檢測(cè)血凝素標(biāo)簽來檢測(cè)融合蛋白的表達(dá)，將擴(kuò)增帶上血凝素的豬IL2冪I：IlFN—Y成熟蛋白基因分別命名為HAmL2年I：IHAmIFNY。將豬mIL2、mlFN—v、HA—mlL2和HA—mIFNY插入PET質(zhì)粒上，