恒古骨傷愈合劑對(duì)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化的影響.pdf

1、目的：探究恒古骨傷愈合劑調(diào)控大鼠BMSCs成脂肪細(xì)胞分化的能力及其對(duì)防治骨質(zhì)疏松癥的作用機(jī)制。
　　方法:以大鼠BMSCs為研究對(duì)象，采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法，從幼年SD大鼠股骨和脛骨骨髓中分離培養(yǎng)BMSCs；免疫組織細(xì)胞化學(xué)染色檢測(cè)BMSCs細(xì)胞純度；恒古骨傷愈合劑分別稀釋500倍、1000倍、2000倍、4000倍，相對(duì)應(yīng)分5組（control組、2×10-3組、1×10-3組、0.5×10-3組、0.25×10-3組），其中co

2、ntrol組加入溶媒；MTT法檢測(cè)各濃度恒古骨傷愈合劑對(duì)BMSCs細(xì)胞毒性；BMSCs在不同濃度恒古骨傷愈合劑干預(yù)下分別向脂肪細(xì)胞方向誘導(dǎo)分化；在恒古骨傷愈合劑干預(yù)后的第21天，Oil Red O染色后顯微鏡下觀察及酶標(biāo)儀定量檢測(cè)成脂肪細(xì)胞分化情況；在恒古骨傷愈合劑干預(yù)后的第7天、14天、21天，Realtime-PCR定量檢測(cè)成脂肪細(xì)胞分化特異性轉(zhuǎn)錄因子過(guò)氧化物酶體增值物激活受體（PPAR）γ、CCAAT/增強(qiáng)子結(jié)合蛋白（C/EBP）

3、α的mRNA相對(duì)表達(dá)量。
　　結(jié)果：采用細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)法獲得大鼠（乳鼠）BMSCs；免疫組織細(xì)胞化學(xué)染色后熒光倒置顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)BMSCs特異性表面抗原CD44陽(yáng)性，陽(yáng)性率為95.47%，而CD19陰性，提示培養(yǎng)的細(xì)胞為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞且純度高；?MTT法檢測(cè)結(jié)果示：在恒古骨傷愈合劑干預(yù)BMSCs后的0.5天、1天、4天、21天，各組與control組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。提示各濃度恒古骨傷愈合劑不論是早期還是晚

4、期，對(duì)BMSCs的增殖及細(xì)胞活性均無(wú)毒性作用；在恒古骨傷愈合劑干預(yù)BMSCs誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞分化的第21天，Oil Red O染色后顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)各濃度藥物均對(duì)BMSCs成脂肪細(xì)胞分化有抑制作用。成濃度依賴(lài)性，且濃度越高抑制作用越強(qiáng)。酶標(biāo)儀定量檢測(cè)OD值分別為（1.104±0.414、0.785±0.085、0.836±0.138、1.008±0.369、1.000±0.291），2×10-3組、1×10-3組與control組比較，差

5、異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），與染色觀察結(jié)果一致；⑤恒古骨傷愈合劑能抑制脂肪細(xì)胞生成，下調(diào)脂肪細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)。在恒古骨傷愈合劑干預(yù)的第7天、14天、21天，Realtime-PCR定量檢測(cè)結(jié)果提示PPARγ、C/EBPα基因表達(dá)量與control組比較下調(diào)且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論：恒古骨傷愈合劑可通過(guò)下調(diào)PPARγ、C/EBPα的表達(dá)而抑制大鼠BMSCs成脂肪細(xì)胞分化。抑制BMSCs成脂肪細(xì)胞分化