血紅蛋白脂質(zhì)體對(duì)犬的安全性與急性失血性貧血療效試驗(yàn).pdf

1、在寵物臨床實(shí)踐中，當(dāng)犬因急性失血危急到生命時(shí)，常常需要通過(guò)輸血療法進(jìn)行急救;并常用全血進(jìn)行輸血，有時(shí)則根據(jù)病情需要進(jìn)行成分輸血。由于犬存在的血型多，臨床輸血前需進(jìn)行交叉配血試驗(yàn)，尤其對(duì)第2次以上接受輸血的犬。交叉配血試驗(yàn)過(guò)程復(fù)雜、繁瑣，影響急救的效率，因此，研究血液替代品并用于臨床試驗(yàn)，是寵物臨床需要解決的重要問題之一。血紅蛋白脂質(zhì)體（Liposome-encapsulated hemoglobin，LHb）是通過(guò)人工制備脂質(zhì)體包埋血紅

2、蛋白而制成的一種生物制品，又稱為“類紅細(xì)胞”，無(wú)抗原性。本文通過(guò)調(diào)整試劑比例，探討包埋率的高低，同時(shí)將LHb輸注到健康犬及失血性貧血犬體內(nèi)，觀察其可行性及對(duì)貧血改善效果，為之后的寵物臨床研究與應(yīng)用提供指導(dǎo)。
　　試驗(yàn)一、犬血紅蛋白脂質(zhì)體的制備
　　采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)結(jié)合超聲振蕩制備血紅蛋白脂質(zhì)體，主要試劑是大豆卵磷脂、膽固醇、維生素E及氯仿。固定維生素E量不變，設(shè)計(jì)不同大豆卵磷脂、膽固醇質(zhì)量比，探討對(duì)血紅蛋白包埋率的影響，并測(cè)定包

3、埋率最高的血紅蛋白脂質(zhì)體特性，從多個(gè)方面檢測(cè)其在體外的穩(wěn)定性。結(jié)果表明:當(dāng)大豆卵磷脂與膽固醇質(zhì)量比在2∶1時(shí)，包埋率最高，達(dá)到37.64％。對(duì)LHb懸浮液進(jìn)行血?dú)鈾z測(cè)，也證實(shí)制備的人工紅細(xì)胞具有氧親和能力。顯微鏡下觀察的LHb顆粒直徑在4.6-7.9μm之間。通過(guò)觀察LHb的外觀顏色變化、檢測(cè)滲透率及氧親和力，發(fā)現(xiàn)LHb在4℃的保存時(shí)間在1個(gè)月左右。
　　試驗(yàn)二、血紅蛋白脂質(zhì)體對(duì)犬的安全性試驗(yàn)
　　本實(shí)驗(yàn)研究血紅蛋白脂質(zhì)體對(duì)

4、犬的臨床安全性。選取12只健康成年犬，隨機(jī)分成2組每組6只，編號(hào)A、B。A組每只犬輸入15 mL脂質(zhì)體林格氏液，B組每只犬輸入等量LHb懸浮液，每周加強(qiáng)注射1次至第6周，并在試驗(yàn)第2，4，6，8周觀察記錄各組犬只臨床癥狀表現(xiàn)，檢測(cè)血常規(guī)、血液生化、尿常規(guī)指標(biāo)變化。體內(nèi)試驗(yàn)前，先將制備LHb與試驗(yàn)犬全血進(jìn)行配型，觀察是否出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集或溶血反應(yīng)。結(jié)果表明:體外配型試驗(yàn)未出現(xiàn)紅細(xì)胞凝集或溶血反應(yīng)。LHb組犬只臨床表現(xiàn)會(huì)出現(xiàn)短暫異常，部分檢測(cè)

5、指標(biāo)出現(xiàn)非病理性異常，其他各項(xiàng)指標(biāo)均與A組檢測(cè)指標(biāo)差異不顯著。通過(guò)對(duì)受試犬生命體征觀察、血常規(guī)、血生化、尿常規(guī)檢測(cè)，初步證實(shí)了血紅蛋白脂質(zhì)體對(duì)犬只的臨床安全性。
　　試驗(yàn)三、血紅蛋白脂質(zhì)體治療犬急性失血性貧血效果觀察
　　為觀察人工制備血紅蛋白脂質(zhì)體(LHb)對(duì)急性貧血患犬的治療效果，建立犬急性失血性貧血病例模型，并使用脂質(zhì)體包埋犬血紅蛋白作輸血療法。12只犬隨機(jī)分成4組，每組3只:空白組（Sham）、輸入血紅蛋白脂質(zhì)體組(

6、LHb)、輸入自體全血組(SAB)、輸入生理鹽水組(Saline)，分別觀察各組供試犬處理前后的臨床表現(xiàn)，同時(shí)測(cè)定血常規(guī)、血生化及尿常規(guī)指標(biāo)。結(jié)果表明，LHb與SAB試驗(yàn)犬相對(duì)于Sham及Saline組試驗(yàn)犬，臨床貧血癥狀均獲明顯改善;第1d時(shí)，LHb試驗(yàn)犬血紅蛋白濃度（167.67±2.96 g/L）明顯高于失血前（135.33±3.18 g/L），第3d開始與SAB組差異不顯著(P＞0.05)。LHb組白細(xì)胞(WBC)與嗜中性(Gr