兔肺挫傷后XAF1表達變化的實驗研究.pdf

1、目的：研究兔肺挫傷后XA目的表達變化，探討XAF1在肺挫傷后細胞凋亡中的作用與意義，為肺挫傷后肺組織細胞凋亡研究提供新思路，新機制。
　　 方法：健康成年新西蘭大白兔20只，采用自由落體裝置撞擊兔右胸壁建立肺挫傷動物模型，分別于撞擊后6h、24h、48h、72h時間點隨機各取5只作為肺挫傷后6h、24h、48h、72h組；另再取5只正常健康兔不予致傷作為對照組。各肺挫傷組及對照組均給予過量麻醉處死，解剖行大體標本觀察，留取肺標本

2、：①光學顯微鏡觀察病理形態(tài)學變化；②透射電鏡觀察細胞凋亡類型；③TUNEL法檢測原位肺組織細胞凋亡；④RT-PCR檢測XAF1mRNA表達變化；⑤免疫組化檢測XAF1蛋白表達。
　　 結(jié)果：
　　 (1)各撞擊組兔均有肺挫傷，以右肺為主且嚴重，部分合并左肺損傷，但左肺損傷較輕且局限。
　　 (2)光學顯微鏡觀察肺挫傷后肺損傷明顯，病理學改變主要表現(xiàn)為彌漫性肺泡內(nèi)出血，部分肺泡破裂，肺間質(zhì)水腫，炎性細胞浸潤。

3、>　　 (3)透射電鏡觀察發(fā)現(xiàn)肺挫傷后肺組織內(nèi)主要為血管內(nèi)皮、肺泡上皮等細胞凋亡，對照組則少見。
　　 (4)TUNEL法檢測肺組織細胞凋亡情況：對照組很少有細胞凋亡(TUEL染色陽性細胞)，肺挫傷后凋亡細胞顯著增多，主要為肺泡上皮、血管內(nèi)皮、支氣管粘膜上皮細胞及部分巨噬細胞等炎癥細胞，與電鏡基本吻合，凋亡指數(shù)隨著病程時間延長先逐漸增加后下降。與對照組相比，傷后6h細胞凋亡指數(shù)即明顯增加，48h達峰值，稍后下降，72h雖下降但

4、仍明顯高于對照組(均P<0.05)；與6小時比較24h、48h、72h細胞凋亡增加仍有意義(P<0.05)；24h與48h比較無意義(P>0.05)，但與24h、48h比較72h細胞凋亡下降有意義(P<0.05)。
　　 (5)XAF1mRNA表達變化：正常對照組肺組織有一定量XAF1mRNA表達，與對照組比，肺挫傷后各組XAF1mRNA表達明顯增強(P<0.05)，其先逐漸升高，在6h即升高，24h繼續(xù)增加，48h表達最強，隨

5、后表達下降；72小時表達降低但仍高于對照組及傷后6小時組(P<0.05)，但低于24h及48h時表達(P<0.05)；24h和48h組表達高于6h組(P<0.05)，但24h與48h比較差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。
　　 (6)免疫組化檢測XAF1蛋白表達及分布：正常對照組肺組織有一定量XAF1蛋白表達，XAF1蛋白主要表達于支氣管粘膜上皮(幾乎全部粘膜細胞均呈陽性表達，只有極少數(shù)細胞不表達或表達較弱)，血管內(nèi)皮、肺泡上皮

6、細胞，部分巨噬細胞、淋巴細胞、支氣管及血管平滑肌等間質(zhì)細胞亦有一部分表達，以PBS代替一抗則所有細胞染色完全陰性。肺挫傷后6h XAF1蛋白陽性細胞增加，24h較明顯，48h最多，稍后下降，傷后各組與對照組比較均有意義(P<0.05)。肺挫傷傷后24h、48h、72h組蛋白陽性細胞均多于6h組(P<0.05)，72h組少于24h和48h組(P<0.05)，但24h組與48h組比較無顯著差異(P>0.05)。對照組及肺挫傷各組XAF1蛋白

7、都主要位于細胞核，未見明確的胞漿染色陽性，說明肺挫傷誘導細胞凋亡未改變XAF1的亞細胞定位。
　　 結(jié)論：
　　 (1)肺挫傷后肺組織細胞凋亡過多，表明細胞凋亡異常參與了肺挫傷后肺損傷。
　　 (2)XAF1基因及蛋白在正常肺組織有一定量表達，肺挫傷后表達升高，說明XAF1參與了調(diào)控肺挫傷后細胞凋亡，從而參與了肺挫傷后肺損傷的病程進展。
　　 (3)XAF1在正常及肺挫傷后肺組織都主要表達于細胞核，說明肺