水稻OsHSP90基因的克隆及功能初步分析.pdf

1、水稻是世界性的糧食作物，其產量以及品質受逆境脅迫的影響非常顯著。因此水稻抗逆研究一直是稻作科學研究的重要課題。近年來，隨著分子生物學理論與技術的進步，逆境相關基因的研究取得了很大進展，一些逆境相關基因已被相繼發(fā)現并被克隆到水稻中，并獲得了抗逆性提高的轉基因植株。這將有助于了解水稻在耐逆方面的分子作用機制，為篩選和培育水稻抗逆品種提供了重要的指導意義。
　　熱激蛋白(Heat Shock Protein) HSP90是生物體內廣泛存

2、在的一類重要的逆境相關蛋白，不僅在逆境條件下高效表達，而且在正常生活的細胞中也廣泛存在。作為生物體內重要的分子伴侶之一，它能在正常以及逆境脅迫下，幫助作用蛋白正確完成折疊、使其空間構象保持完整以及維持其生物學功能，同時與許多底物蛋白結合形成復合體參與調控細胞生理代謝及信號轉導。此外，大量研究表明其超表達后能夠增強植物體的抗逆性。
　　本研究室在早期階段通過熒光差顯技術篩選到一個水稻熱激蛋白HSP90，其定位在水稻日本晴9號染色體上

3、。在此基礎上，本論文主要討論了它在水稻體內所行使的一些生物學功能，為進一步深入研究OsHsp90基因在逆境應答中所起的調控作用打下一定基礎。主要研究結果如下:
　　1.對OsHSP90基因進行生物信息學分析發(fā)現，該基因編碼框為2100bp，編碼699個氨基酸，等電點約為4.97，預測分子量為80.19 kDa。蛋白質結構域分析表明第30-179 AA殘基構成一個ATPase結構域，第185-699 AA殘基是Hsp90蛋白超家族典

4、型結構域。
　　2.運用實時qRT-PCR技術分析了水稻日本晴中OsHSP90基因在高溫、干旱、鹽脅迫等逆境處理下的表達情況，發(fā)現OsHSP90基因是一個多逆境誘導基因，并且受熱激影響最顯著。
　　3.構建了該基因的原核表達載體，并對其進行了體外誘導表達，同時探究了表達OsHSP90蛋白的大腸桿菌在逆境條件下的生長狀況，結果顯示該基因的表達能增強大腸桿菌的耐高溫性和耐滲透脅迫性，而與大腸桿菌的耐鹽性的提高似乎沒有太大關系。<