Pdlim2在高脂血癥大鼠腎小球足細胞中的表達改變及意義.pdf

1、隨著我國人民生活水平的提高，脂代謝紊亂的發(fā)病率也逐年上升，脂代謝紊亂不僅引發(fā)各種心腦血管病，而且高脂飲食既可加重腎病患者已有的腎損害，又會導致健康的腎臟受損。動物實驗證實，原發(fā)性脂代謝紊亂導致的腎損害可出現(xiàn)蛋白尿的臨床表現(xiàn)，其病理類型多為腎小球局灶性節(jié)段性硬化。
　　足細胞(Podocyte)是腎小球固有的細胞之一，它依靠其足突及其足突間的裂孔膜共同構成腎小球濾過屏障的最外層，是阻止血漿蛋白丟失而形成蛋白尿的最后屏障。研究發(fā)現(xiàn)，足

2、細胞損傷早期以包括足突融合、消失為主的形態(tài)損傷和以足突與腎小球基底膜粘附功能損傷為特征，同時可伴有裂孔隔膜成分表達的異常，導致腎小球濾過膜完整性破壞而出現(xiàn)蛋白尿。在后期，足細胞脫落、凋亡，數(shù)量密度減低，足細胞活化分泌炎癥介質(zhì)、分泌細胞外基質(zhì)，則與系膜細胞一起共同參與腎小球硬化的發(fā)生。近來的一些研究證實，脂代謝紊亂早期主要是導致腎小球足細胞的損傷，而不是系膜細胞的損傷。腎小球足細胞的這種足突融合及其相應功能損害，可能是脂代謝紊亂腎損害最早

3、期的環(huán)節(jié)，而系膜細胞損傷及活化等這些病理機制，則多發(fā)生在脂代謝紊亂導致腎損害的后期。
　　Pdlim2是新發(fā)現(xiàn)在腎小球足細胞的足突中表達的一種肌動蛋白(actin)調(diào)節(jié)蛋白，主要在足細胞的次級足突表達。Pdlim2蛋白是輔肌動蛋白關聯(lián)的LIM蛋白(ALP)超家族的成員之一，存在于許多細胞的細胞核內(nèi)，它在N末端含有一個PDZ結構域，在C末端含有一個LIM結構域。LIM結構域作為蛋白與蛋白之間相互作用的結構域，在調(diào)節(jié)actin細胞骨架

4、的形成、細胞分化和信號轉(zhuǎn)導等中發(fā)揮重要作用。最近的研究發(fā)現(xiàn)，表現(xiàn)為腎病綜合征的微小病變型腎病綜合征(MCNS)和膜性腎病(MN)患者的足細胞中，Pdlim2的表達降低，且表現(xiàn)出明顯的足細胞足突回縮、消失，尿蛋白顯著增加。而Pdlim2在高脂血癥大鼠腎小球足細胞中的表達情況及變化卻很少有人研究。本研究通過建立高脂血癥大鼠模型，觀察高脂血癥大鼠及辛伐他汀治療高脂血癥大鼠模型24h尿蛋白、血清膽固醇(TC)及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)水

5、平等生化指標，電鏡觀察大鼠腎小球足細胞的損害，免疫熒光染色法及免疫印跡(Western blot)檢測大鼠腎臟Pdlim2蛋白分布及表達的改變并探討其發(fā)生機制，為進一步了解高脂血癥對腎臟早期的影響及干預提供理論依據(jù)。
　　目的:通過高脂飲食誘導法構建高脂血癥大鼠模型，結合透射電鏡、免疫熒光、Western blot等檢測手段，觀察高脂血癥大鼠腎小球足細胞Pdlim2的表達變化，并探討辛伐他汀對其表達的干預作用及機制。
　　方

6、法:同品系6～8周齡SD雄性大鼠30只，適應性喂養(yǎng)一周后，隨機分入以下3組。每組各10只大鼠:正常對照組(NG)，給予基礎飼料喂養(yǎng);高脂飲食組(HG)，按高脂血癥動物模型方法自由進食高脂飼料(2％膽固醇、0.3％去氧膽酸鈉、7.5％豬油、0.2％丙基硫氧嘧啶、5％蛋黃粉和85％基礎飼料）;辛伐他汀組(SG)，高脂飼料喂養(yǎng)的同時給予辛伐他汀(10mg·kg-1·d-1)水溶液灌胃，每日1次，治療10周;正常對照組和高脂飲食組均自由進水。于

7、高脂飲食喂養(yǎng)的第4周和第10周各組取5只大鼠處死，測定24h尿蛋白量、血清TC和LDL-C水平，電鏡觀察大鼠腎小球足細胞的損害，免疫熒光染色法及Western blot檢測大鼠腎臟Pdlim2蛋白分布及表達情況。數(shù)據(jù)結果以均數(shù)±標準差（(x)±s）表示，數(shù)據(jù)用SAS9.0軟件處理，多組資料比較采用單因素方差分析，兩組資料比較采用t檢驗，P值＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
　　結果:(1)高脂飲食飼養(yǎng)的大鼠血脂、尿蛋白定量的變化:H

8、G組和SG組大鼠的血清LDL-C和TC水平，從實驗第4周開始均逐漸增加，在同一時間點上，HG組和SG組大鼠的血清LDL-C和TC水平分別與同期NG組比較，明顯升高，差異有顯著性(P＜0.05)，而SG組大鼠的血清LDL-C和TC較同期HG組明顯減低，兩兩比較，差異有顯著性(P＜0.05)。實驗第10周時HG組和SG組大鼠尿蛋白水平較實驗第4周(P＜0.05); SG組和HG組大鼠尿蛋白較NG組明顯升高，而SG組大鼠尿蛋白水平較同期HG組

9、明顯減低，兩兩比較，差異有顯著性(P＜0.05)。(2)高脂飲食飼養(yǎng)的大鼠腎臟足細胞損害:透射電鏡下觀察顯示，HG組大鼠腎小球于實驗第4周時可見足細胞部分輕度足突融合;10周時可見足細胞足突廣泛融合、彎曲、增粗，足細胞水腫;SG組足細胞足突融合的其損害程度均輕于HG組。(3)免疫熒光染色觀察各組大鼠腎小球Pdlim2的表達:NG組大鼠在實驗第4周和第10周均可見腎小球內(nèi)有Pdlim2蛋白表達，HG組大鼠實驗第4周腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白

10、表達略有減少;而實驗第10周時，HG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白表達明顯減少，SG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2蛋白表達均低于同期NG組大鼠，同時又高于HG組大鼠腎小球內(nèi)Pdlim2的表達。(4)免疫印跡(Western blotting)檢測高脂飲食大鼠腎小球Pdlim2蛋白表達的影響:實驗第4周HG組大鼠腎組織Pdlim2蛋白表達較同期NG組大鼠減少27％，差異有顯著性（P＜0.05）;SG組和NG組差異無統(tǒng)計學意義。實驗第10周時，