急性腹瀉患者變形桿菌分子分型和耐藥特征.pdf

1、目的：
　　變形桿菌在食源性疾病病原菌中占有非常重要的地位，本研究以天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者糞便標(biāo)本中分離的變形桿菌為研究對(duì)象，進(jìn)行PFGE分型，抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，1類整合酶基因、2類整合酶基因和變形桿菌中基因島連接序列的PCR擴(kuò)增和測(cè)序，分析菌株的同源性特點(diǎn)、耐藥特征與可能的耐藥播散機(jī)制，為了解多重耐藥變形桿菌從食物和環(huán)境向人體的播散、防控變形桿菌引起的食源性疾病與抗菌藥物的合理應(yīng)用提供依據(jù)。
　　材料與

2、方法：
　　1、收集2013年5月-10月天津醫(yī)科大學(xué)第二醫(yī)院腸道門診急性腹瀉患者糞便標(biāo)本中分離的變形桿菌，利用傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法和以tuf基因?yàn)榘谢虻腜CR方法對(duì)菌株進(jìn)行分離鑒定。
　　2、脈沖場(chǎng)凝膠電泳（PFGE）：提取變形桿菌菌株DNA，經(jīng)限制性內(nèi)切酶SfiI酶切后進(jìn)行脈沖場(chǎng)凝膠電泳分析。
　　3、藥物敏感性試驗(yàn)：采用Kirby-Bauer紙片擴(kuò)散法測(cè)定變形桿菌對(duì)氯霉素、鏈霉素、磺胺甲噁唑/甲氧芐啶、四環(huán)素、頭孢曲

3、松、頭孢他啶、亞胺培南、環(huán)丙沙星等18種抗菌藥物的耐藥性，并分析變形桿菌的耐藥特點(diǎn)。
　　4、PCR方法擴(kuò)增變形桿菌中1類整合酶基因、2類整合酶基因和變形桿菌中基因島左右連接序列，對(duì)2類整合酶基因PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果進(jìn)行比對(duì)，分析其內(nèi)部終止密碼子是否有突變；分析菌株的耐藥性與整合子、基因島連接序列之間的關(guān)聯(lián)。
　　結(jié)果：
　　1、本研究用PCR方法和生化鑒定均檢測(cè)出62株變形桿菌，其中生化鑒定出48株奇異變形桿菌，8

4、株普通變形桿菌，4株產(chǎn)粘液變形桿菌，2株潘氏變形桿菌；基于tuf基因作為靶基因的PCR方法可以快速鑒定出腹瀉患者糞便中的變形桿菌。
　　2、62株變形桿菌共分為51個(gè)不同的PFGE帶型，相似性在40％-100%之間。62株變形桿菌中分別有5株、3株、3株、2株、2株、2株菌各自具有100%相似度的PFGE帶型，且各組菌株分離時(shí)間相近，提示本地區(qū)出現(xiàn)相同克隆株所致的聚集性感染。
　　3、急性腹瀉患者分離的變形桿菌呈現(xiàn)明顯的多重

5、耐藥（26%）和ACSSuT耐藥（16%），少數(shù)菌株對(duì)亞胺培南中介、對(duì)三代頭孢菌素耐藥；出現(xiàn)了對(duì)臨床重要抗菌藥物（三代頭孢菌素、氟喹諾酮和亞胺培南）都不敏感的菌株。
　　4、1類和2類整合子的攜帶率分別為54%（27/50）和32%（16/50），1類和2類整合子均陽(yáng)性的為26%（13/50）；2類整合子陽(yáng)性的16株菌株中，有6株（37.5%）菌株的2類整合酶基因內(nèi)部原來(lái)的終止密碼子TAA突變?yōu)榭删幋a氨基酸的密碼子CAA；36%的

6、菌株（18/50）耐藥基因島連接序列陽(yáng)性。
　　5、多重耐藥菌株攜帶1類整合子（92.3%）、2類整合子（61.5%）以及同時(shí)攜帶這兩類整合子（53.8%）的比例明顯高于非多重耐藥菌株（P分別為0.001、0.014、0.023）。
　　6、ACSSuT耐藥菌株攜帶2類整合子（87.5%）以及同時(shí)攜帶1類、2類整合子、基因島連接序列（50%）的比例明顯高于非ACSSuT耐藥菌株（P分別為0.001、0.016）。
　　

7、結(jié)論：
　　1、傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法和PCR檢測(cè)相結(jié)合可對(duì)變形桿菌進(jìn)行快速準(zhǔn)確的檢測(cè)，有利于臨床及時(shí)診斷和治療。變形桿菌相同克隆株所致的聚集性感染在本地區(qū)可能并不少見(jiàn)。
　　2、本地區(qū)急性腹瀉患者糞便中分離的變形桿菌呈現(xiàn)明顯的多重耐藥和ACSSuT耐藥，少數(shù)菌株甚至對(duì)臨床重要的抗菌藥物（三代頭孢菌素、亞胺培南和氟喹諾酮）均不敏感。菌株攜帶1類和2類整合子的比例較高，與菌株的多重耐藥、ACSSuT耐藥有關(guān)。
　　3、本地區(qū)急性