(1,3)-β-D葡聚糖的檢測方法學研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、人體血清中(1,3)-β-D葡聚糖(βG)的含量測定是臨床上侵襲性真菌感染的檢測指標。本文克隆了能與βG特異性結(jié)合的美洲鱟屬G因子α亞基片段a基因(Gαa),代替了天然珍惜鱟血,不用擔心資源的枯竭和原料的穩(wěn)定性。分子量為1251bp,選擇pET-15b為表達載體,構(gòu)建了工程菌BL21-pET-15b-Gαa。原核表達并純化了Gαa蛋白,質(zhì)量為43kDa,通過鎳柱純化后,純度達到95%以上,濃度為2mg/mL。
  利用了Gαa蛋白

2、與βG特異性結(jié)合的特性,探究檢測βG含量的3種方法:酶聯(lián)免疫檢測方法、比濁檢測方法和碳量子點熒光生物檢測方法。
  模擬雙抗夾心法,可以檢測到βG濃度下限為20ng/mL,建立了酶聯(lián)免疫檢測的方法。
  在紫外分光光度計340nm下檢測其吸光度與加入βG含量呈正線性相關,線性范圍3.125-200μg/mL,R2=0.997,檢測限為3.125μg/mL,建立了比濁檢測方法。
  利用Gαa蛋白可以和氨基化修飾碳量子點

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