姜類中藥抑制腫瘤細胞生長及誘導腫瘤細胞凋亡作用實驗研究.pdf

1、背景:隨著中醫(yī)學對于癌癥治療的深入探索,中醫(yī)藥在提高腫瘤患者生存質量和延長生存時間等方面得到廣泛的運用,中西醫(yī)結合療法在癌癥治療領域被眾醫(yī)家所肯定。近年來,許多臨床及實驗研究顯示,姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜等在抑制腫瘤病的進展、減輕放化療毒副作用等方面作用具有明顯優(yōu)勢。
　　 目的:本課題旨在研究姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜對胃癌SGC-7901細胞、肺癌A549細胞的體外抗癌作用以及對抗癌機制進行初探,為臨床辨病辨證

2、合理有效使用姜類中藥提供一定實驗及理論依據。
　　 方法:采用MTT,3H-TdR摻入法觀察姜類中藥干姜、炮姜、姜黃、高良姜煎劑以及姜類中藥含藥血清對胃癌SGC一7901細胞、肺癌A549細胞的體外生長抑制作用。在體外抑瘤實驗的基礎上,采用AnnexinV-FITC/PI雙染法觀察姜類中藥血清誘導胃癌SGC一7901細胞、肺癌A549細胞凋亡作用,PI單染法觀察姜類中藥血清對肺癌A549細胞周期調節(jié)作用。
　　 結果:(

3、1)姜類中藥煎劑(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)對肺癌A549細胞均具有一定的增殖抑制作用,干姜、炮姜、姜黃的抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強,均具有顯著統(tǒng)計學差異,提示它們對A549細胞的增殖抑制作用呈濃度依賴性。(2)高良姜從10mg/ml到40mg/ml濃度對A549生長的抑制作用都接近100％,無明顯濃度依賴性。(3)炮姜、高良姜在10mg/ml濃度下對A549抑制作用有統(tǒng)計學意義,其他藥物在10mg/ml濃度下抑制率無統(tǒng)計學意義,姜

4、黃在達到40mg/ml劑量后對A549的抑制作用有統(tǒng)計學意義。(4)四藥中干姜的濃度依賴性最明顯,隨劑量上升,對A549細胞抑制作用加強明顯并超過炮姜,有統(tǒng)計學意義。(5)姜類中藥對A549的體外抑制作用強弱順序為在10mg/ml濃度下:高良姜＞炮姜＞干姜＞姜黃;在40mg/ml濃度下:高良姜＞干姜＞炮姜＞姜黃。(6)姜類中藥煎劑對胃癌SGC-7901細胞均具有一定的抑制增殖作用,干姜、炮姜、高良姜抑制作用隨劑量的加大而逐漸增強,均具有

5、顯著統(tǒng)計學差異,提示它們對胃癌SGC-7901細胞具有增殖抑制作用,其抑制作用呈濃度依賴性。(7)姜黃對SGC-7901的抑制作用濃度依賴性無統(tǒng)計學意義。(8)高良姜在低濃度下(10mg/ml),對胃癌SGC-7901細胞的抑制作用即迅速增強,到達平臺期(大于90％)。(9)在本實驗中,千姜、炮姜對胃癌SGC-7901細胞的抑制作用:炮姜＞干姜,且有統(tǒng)計學意義。(10)姜類中藥對SGC-7901的體外抑制作用強弱順序為:在20mg/ml

6、濃度下高良姜＞炮姜＞姜黃＞干姜,在40mg/ml濃度下高良姜＞炮姜、干姜＞姜黃。(11)姜類中藥含藥血清對肺癌A549細胞生有增殖抑制作用,其中以15％血清協(xié)同抑制作用最佳,此時抑制作用大小表現為炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜。(12)姜類中藥血清對胃癌SGC-7901細胞有增殖抑制作用,其中以15％血清濃度協(xié)同抑制作用最佳,此時抑制作用表現為干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(13)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測,姜類中藥血清可誘

7、導A549細胞凋亡,同時伴有細胞的壞死.干姜組誘導細胞凋亡作用最佳,其他各組差異不明顯。(14)通過PI單染色法檢測姜類中藥血清干預肺癌A549細胞周期,各組藥物血清顯示出不同程度的G2/M期阻滯,其中以干姜組較高,炮姜組顯示出一定程度G0/G1期阻滯。(15)通過AnnexinV-FITC/PI雙染色法檢測胃癌SC-C-7901細胞凋亡,姜類中藥作用48h可誘導胃癌SGC-7901細胞凋亡,同時伴有細胞的壞死.姜黃組誘導細胞凋亡作用最

8、佳,其他各組差干姜＞炮姜＞高良姜。
　　 結論:(1)姜類中藥煎劑抑制腫瘤細胞體外生長實驗顯示:姜類中藥(干姜、炮姜、姜黃、高良姜)均有抑制肺癌A549細胞、胃癌SGC-7901細胞增殖作用,對于不同細胞,其抑制作用強弱有不同特點。在10mg/ml濃度下,炮姜對于肺癌、胃癌細胞的抑制作用均大于干姜,干姜的抑制作用有明顯的濃度依賴性,隨濃度上升抑制作用顯著增強,對于肺癌,在40mg/ml濃度下干姜優(yōu)于炮姜。姜黃較其他實驗藥物對腫瘤

9、細胞的增殖抑制作用弱,在40mg/ml濃度下對于腫瘤細胞增殖抑制作用有顯著統(tǒng)計學意義。高良姜在極小劑量(小于10mg/ml濃度)時即對肺癌A549細胞、胃癌SGC-7901細胞的增殖即有抑制作用,并迅速上升到平臺期(抑制率＞90％)。(2)姜類中藥血清抑制腫瘤細胞生長實驗顯示:姜類中藥經體內代謝吸收后制備血清對細胞的抑制作用與生藥制劑不完全相同。在本實驗中,姜類中藥血清總體評價以15％血清培養(yǎng)條件對腫瘤細胞增殖抑制作用最佳。(3)在15

10、％血清培養(yǎng)條件下,相當于20g/日/人造模新西蘭兔的姜類中藥血清對肺癌細胞A549抑制作用:炮姜＞姜黃＞高良姜＞干姜;對胃癌細胞SGC-7901抑制作用:干姜＞炮姜＞高良姜＞姜黃。(4)在姜類中藥血清誘導腫瘤細胞凋亡實驗顯示,姜類中藥具有明顯的誘導肺癌胃癌細胞凋亡作用。干姜對肺癌誘導凋亡作用大于其他藥物,姜黃對胃癌誘導凋亡作用大于其他藥物。姜類中藥干預細胞周期實驗顯示,姜類中藥抑制腫瘤細胞生長與姜類中藥含藥血清對腫瘤細胞周期G2/M期和