Hedgehog信號(hào)通路對(duì)宮頸癌的影響.pdf

1、目的：探討Hedgehog(Hh)信號(hào)通路在宮頸癌組織與細(xì)胞系的表達(dá)情況，并初步研究Hh信號(hào)通路抑制劑cyclopamine對(duì)宮頸癌細(xì)胞系HeLa和SiHa的殺傷作用和機(jī)制，為宮頸癌的早期診斷及治療新靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)提供理論依據(jù)。
　　方法：(1)用免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Shh，Ihh，Ptch，Smo，Gli-1，Gli-2，Gli-3抗體在38例鱗狀細(xì)胞癌，23例CINⅢ，10例CINⅡ，4例CINⅠ，32例正常宮頸粘膜上皮組織標(biāo)本

2、中的表達(dá)及分布；(2)提取38例宮頸癌組織中的DNA，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）檢測(cè)人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus，HPV）16和18；(3)應(yīng)用MTT法檢測(cè)cyclopamine對(duì)體外培養(yǎng)的宮頸癌細(xì)胞系HeLa和SiHa的生長(zhǎng)抑制作用，同時(shí)觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化；(4)通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法觀察HeLa細(xì)胞中Hh信號(hào)通路相關(guān)基因蛋白及Bax和Bcl-2的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：(1)在宮頸癌和癌前病變組織（C

3、INⅡ/Ⅲ）中Hh信號(hào)通路相關(guān)基因蛋白表達(dá)均顯著高于正常宮頸粘膜組織。除Gli-1/2陽(yáng)性表達(dá)位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核外，其余Hh信號(hào)通路相關(guān)基因蛋白表達(dá)均位于細(xì)胞質(zhì)。Ihh、Ptch、Smo、Gli-1、Gli-3在正常宮頸粘膜上皮中幾乎不表達(dá)。在宮頸癌中，上述七種Hh信號(hào)通路相關(guān)基因蛋白表達(dá)與正常宮頸組織相比顯著增強(qiáng)（P<0.05）。Shh的表達(dá)在正常宮頸上皮向CIN轉(zhuǎn)變及CIN向?qū)m頸癌轉(zhuǎn)變過(guò)程中呈雙重（均）增強(qiáng)。以上結(jié)果提示Hh信號(hào)通路

4、在宮頸癌及CIN中被廣泛激活。(2)38例宮頸癌組織中HPV16陽(yáng)性率是71.1％，而HPV18均呈陰性。在宮頸癌組織中HPV16和18的感染與Hh信號(hào)通路相關(guān)基因蛋白表達(dá)無(wú)顯著性關(guān)系。(3)MTT比色法測(cè)定結(jié)果顯示cyclopamine能抑制HeLa和SiHa細(xì)胞增殖，其抑制率呈劑量依賴(lài)性；倒置顯微鏡下可觀察到，兩細(xì)胞株的cyclopamine組形態(tài)和數(shù)量上均出現(xiàn)改變。(4)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果顯示，經(jīng) cyclopamine處理的H