沉默F(xiàn)EN1增強CDDP對胃癌SGC-7901細胞化療的敏感性.pdf

1、背景：瓣狀核酸內切酶1（FEN1）在DNA復制和修復中起關鍵作用，許多研究證實其表達水平與癌癥的發(fā)展和預后相關。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)FEN1的表達水平與胃癌患者的預后及發(fā)展相關；同時發(fā)現(xiàn)下調FEN1，可抑制胃癌SGC-7901細胞的生長和促進細胞凋亡，意味著FEN1可能會成為治療胃癌的潛在靶點。而且，已有研究表明FEN1的抑制劑可增強DNA烷化劑化療的敏感性。這些結果提示了FEN1可能會成為增強DNA烷化劑等化療藥臨床治療的一個有效靶點

2、。然而，關于FEN1與CDDP之間的具體關系，還缺乏更深層次的研究。本課題擬在前期工作基礎上，進一步研究FEN1是否可作為增強CDDP對胃癌SGC-7901細胞化療敏感性的靶點，為FEN1作為胃癌個性化、靶向性治療的新靶點提供實驗依據(jù)和理論支持。
　　目的：探討利用RNA干擾技術特異性沉默胃癌SGC-7901細胞的FEN1對CDDP化療敏感性的影響。
　　方法：
　　1.以CDDP作為誘導劑誘導FEN1的表達，通過We

3、stern-blot驗證FEN1的表達水平，探討CDDP是否可誘導FEN1的表達上調。
　　2.使用實驗前期成功構建的特異性FEN1-siRNA靶向序列，NC-siRNA及未轉染組（Untransfected組）作為對照組，Western-blot方法檢測轉染胃癌SGC-7901細胞后的FEN1蛋白表達以期檢測抑制率。
　　3.MTT法分別檢測FEN1-siRNA+CDDP實驗組、NC-siRNA+CDDP及Untransf

4、ected+CDDP組對照組胃癌SGC-7901細胞的生長增殖活性。即在不同的實驗分組中分別予以不同濃度CDDP和10μ MCDDP予以不同時間間隔處理。
　　4.利用流式細胞術（FCM）檢測FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組、NC-siRNA+CDDP處理組及Untransfected+CDDP處理組的胃癌SGC-7901細胞株的細胞凋亡率變化；同時利用Western Blot方法檢測各組Bcl-2、Bcl-xl和Bax的蛋白

5、表達水平變化。
　　結果：
　　1.Western Blot結果顯示FEN1的蛋白表達水平隨著CDD P的濃度增加(0，10,20,30,40,50μM CDDP處理48h)及時間延長(30μM CDDP處理時間為24h,48h和72h)而呈依賴性增加（P<0.05）。
　　2.Western-blot方法檢測結果顯示，試驗組FEN1-siRNA組細胞中的FEN1的蛋白表達明顯低于NC-si RNA及Untra nsf

6、ected兩個對照組（P<0.05）。
　　3.MTT法結果顯示FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌SGC-7901細胞株在不同的CDDP濃度(0,2.5,5,10,20,30,40和50μM)和10μM CDDP予以不同時間(24h,48和72h)處理的條件下，其細胞生存率均明顯低于NC-siR NA+CDDP及 Untransfected+CDDP兩個對照組(P<0.05)。
　　4.流式檢測結果顯示，F(xiàn)EN1-s

7、iRNA+CDDP聯(lián)合組的胃癌 SGC-7901細胞的細胞凋亡率顯著高于NC-siRNA+CDDP及Untransfected+CDDP兩個對照組（P<0.05）。同時,Western-blot方法結果顯示，在FEN1-siRNA+CDDP聯(lián)合組中，其Bcl-2及Bcl-xl的蛋白表達水平明顯低于對照組；相反，Bax蛋白表達水平明顯高于對照組(P<0.05)。
　　結論：在CDDP的誘導條件下，F(xiàn)EN1的蛋白表達水平顯著地被上調，