柚皮素對CYP3A代謝酶和P-糖蛋白轉運體影響的研究.pdf

1、柚皮素（Naringenin, NGR）是一種二氫黃酮類化合物，在中藥中廣泛存在。現(xiàn)代藥理學研究表明NGR具有較強的藥理活性，如抗氧化、降血脂、抗腫瘤、抗動脈粥樣硬化。本研究基于細胞色素 P4503A（cytochrome P4503A, CYP3A）和P-糖蛋白（P-glycoprotein, P-gp）調節(jié)交疊性，研究NGR對代謝酶CYP3A和血腦屏障的多藥耐藥蛋白P-gp的影響。主要內容如下：
　　1.改進生物樣品分析方法<

2、br>　　改進微透析液及血漿中咪達唑侖（midazolam, MDZ）/1′-羥基咪達唑侖（1′-hydroxymidazolam,1′-OH MDZ）的LC-MSn方法，大鼠腦微血管內皮細胞（rat brain microvascular endothelial cells, rBMECs）中地高辛（digoxin, DIG）的LC-MSn方法，羅丹明123（Rhodamine123, Rho123）的高效液相色譜熒光法。
　　

3、實驗結果顯示微透析液中MDZ、1′-OH MDZ峰形較好，在5 min內即可完成一次分析，MDZ和1′-OH MDZ的線性范圍分別為0.78～100和0.195～12.5μg·L-1，最低定量下限0.2μg·L-1，批內、批間RSD均＜7％，RE值在-1.34%～-8%范圍內。大鼠血漿樣品中MDZ和1′-OH MDZ的線性范圍分別為15.63～8000、3.91～1000μg·L-1.
　　DIG與內標分離較好，在5 min內即可

4、完成一次分析，樣品處理簡單，線性范圍為5～160μg·L-1，最低定量下限5μg·L-1.分析物Rho123的色譜峰峰型好，細胞中的雜質不干擾目標峰，其保留時間4.7 min，線性范圍為1～16μg·L-1.
　　2. NGR對代謝酶CYP3A的影響研究
　　確立腦微透析聯(lián)合頸靜脈取血方法，比較靜脈注射NGR前后大鼠腦內及血漿中MDZ/1′-OH MDZ的藥代動力學過程。
　　微透析探針植入大鼠側腦室，分別靜脈注射5%

5、β-環(huán)糊精（對照組）和3.75，7.5，15 mg·kg-1 NGR（給藥組），5 min后靜脈注射MDZ（劑量為5 mg·kg-1），同時連續(xù)收集腦透析液樣品及血漿樣品（按3，7，15，30，60，90，120，150 min采血點進行采樣），采用LC-MSn測定MDZ/1′-OH MDZ濃度，腦內藥物濃度經(jīng)探針回收率校正后，用WinNonlin軟件計算MDZ/1′-OH MDZ的藥動學參數(shù)。
　　結果顯示給予NGR后，腦中MD

6、Z、1′-OH MDZ藥代參數(shù)改變。3.75 mg·kg-1 NGR組中MDZ的Ke減小，t1/2升高，MRT0-∞增加；而15 mg·kg-1 NGR組中Ke降低，t1/2、MRT0-∞增加，1′-OH MDZ的MRT0-∞增加。
　　股靜脈給予NGR，血漿中MDZ、1′-OH MDZ的藥代參數(shù)改變。3.75 mg·kg-1 NGR組中MDZ的Ke升高，MRT0-t、t1/2減小，AUC0-t、AUC0-∞顯著性降低， CL、V

7、d顯著性增加。7.5 mg·kg-1 NGR組中1′-OH MDZ的AUC0-t增加，MRT0-t顯著性降低。而15 mg·kg-1 NGR組中MDZ的t1/2升高，AUC0-t、AUC0-∞顯著性增加，MRT0-t、MRT0-∞降低。
　　3. NGR對轉運蛋白P-gp的影響研究
　　確立rBMECs的藥物攝取模型，在此模型基礎上研究DIG和Rho123的攝取特性及NGR（50μmol·L-1）對二者攝取的影響。
　

8、　實驗結果表明DIG在rBMECs攝取具有時間依賴性，10～90 min細胞內DIG含量隨時間延長而增加，90～120 min之間達攝取穩(wěn)態(tài)。與對照組相比，在40 min時NGR使攝取量增加了76.2%，90 min時增加了75.9%. Rho123在rBMECs攝取同樣具有時間依賴性，10～60 min細胞內Rho123含量隨時間延長而增加，60～120 min之間達攝取穩(wěn)態(tài)。與對照組相比，在60 min時NGR使攝取量增加了28.5