CBP治療通過調(diào)節(jié)ROCK介導(dǎo)的細胞間緊密連接蛋白改善SAP患者內(nèi)皮細胞通透性.pdf

1、背景：重癥急性胰腺炎(SAP)作為一種常見的急腹癥，病因復(fù)雜，病情進展快，可迅速發(fā)展為全身炎癥綜合癥(SIRS)，進而發(fā)展為多器官功能障礙綜合征(MODS)，而內(nèi)皮細胞作為血管的最內(nèi)層屏障，其細胞間通透性增加可能參與了MODS的發(fā)生。細胞間緊密連接蛋白是細胞間連接的重要組成部分，在維持內(nèi)皮屏障完整中發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用。近年來連續(xù)性血液凈化(CBP)治療已廣泛應(yīng)用臨床搶救包括SAP、MODS在內(nèi)的各種危重患者的治療，明顯的改善了患者的預(yù)

2、后。我們既往的研究顯示CBP治療可以改善SAP患者內(nèi)皮細胞通透性，但其機制是否與細胞間緊密連接異常表達與分布有關(guān)，有待進一步深入研究。本文旨在探討細胞間緊密連接蛋白在CBP改善SAP患者內(nèi)皮細胞屏障功能障礙中的作用。
　　方法：用SAP患者CBP治療的不同時間點血清刺激人臍靜脈內(nèi)皮細胞，或予不同濃度Rho激酶(ROCK)抑制劑Y-27632(5μM、10μM、20μM)預(yù)處理后加入SAP治療前血清干預(yù)內(nèi)皮細胞。Fluorescen

3、ce reader檢測單層內(nèi)皮細胞對熒光素標記的牛血清白蛋白的通透量，免疫熒光染色檢測緊密連接蛋白Occludin、Claud in-1的分布與重排，Western blot檢測Occludin、Claud in-1蛋白表達水平的變化，共聚焦顯微鏡觀察F-actin應(yīng)力微絲的形成。
　　結(jié)果：正常單層內(nèi)皮細胞Occludin、Claud in-1主要分布在細胞周邊，細胞與細胞間連續(xù)連接形成光滑的連接帶。SAP患者CBP治療前血清刺

4、激內(nèi)皮細胞后，細胞通透性較對照組明顯增加，而緊密連接蛋白Occludin、Claud in-1的連接中斷或破壞，表達減少，F(xiàn)-actin應(yīng)力微絲的密度及數(shù)量均增大，而經(jīng)CBP治療后血清刺激內(nèi)皮細胞，內(nèi)皮細胞通透性較CBP治療前組降低，而Occludin、Claudin-1的連接中斷或破壞有所恢復(fù)，蛋白表達水平增加，且具有顯著性差異；應(yīng)力微絲的數(shù)量和密度較CBP治療前組減少。加入Rho激酶抑制劑Y-27632處理細胞后，與CBP治療前組比

5、，內(nèi)皮細胞通透性降低，緊密連接蛋白Occludin、Claudin-1的連接中斷或破壞較CBP治療前組改善，同時蛋白表達水平增加，F(xiàn)-actin應(yīng)力微絲的形成較CBP治療前組減少，且其效應(yīng)呈劑量依賴性。
　　結(jié)論：SAP患者血清誘導(dǎo)的單層內(nèi)皮細胞通透性明顯增加，而CBP治療后SAP患者血清誘導(dǎo)的內(nèi)皮細胞的通透性降低，其機制可能是與CBP治療后改善ROCK介導(dǎo)緊密連接蛋白Occludin、Claudin-1的表達和分布及細胞骨架蛋白