甲狀腺乳頭狀癌細胞對促甲狀腺激素反應性研究.pdf

1、目的:甲狀腺癌是內分泌系統疾病中發(fā)病率最高的惡性腫瘤，是最常見的甲狀腺惡性腫瘤，約占全身惡性腫瘤的1％。其中甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是最為常見的病理類型[1]，約占成人甲狀腺癌的60％和兒童甲狀腺癌的全部。近幾十年間，甲狀腺乳頭狀癌發(fā)病率在世界范圍內呈現出迅猛增長的態(tài)勢。然而甲狀腺乳頭狀癌的惡性程度較低，即便較早出現頸淋巴結轉移，但是預后較好，10年生存率仍能達到90％以上。目前被

2、公認的甲狀腺乳頭狀癌標準的綜合治療方式是手術切除治療以及術后輔助治療。手術治療是甲狀腺乳頭狀癌的基本治療方法，術后輔助治療可進一步降低術后復發(fā)率。其中內分泌治療在術后輔助治療中占據著重要地位。
　　內分泌治療即為甲狀腺乳頭狀癌患者接受手術后應終身服用甲狀腺素片，通過下丘腦-垂體-甲狀腺軸的自身調節(jié)來完成，其意義在于預防甲狀腺功能減退和抑制促甲狀腺素(thyroid stimulating hormone，TSH)。內分泌治療甲狀腺

3、乳頭狀癌的主要依據為甲狀腺乳頭狀癌細胞內存在TSH受體的表達，而且分化程度越高的腫瘤，其TSH受體表達越高?；颊咄ㄟ^口服藥物攝入適量的甲狀腺素，促使人體內分泌的TSH減少，從而降低TSH對殘余癌組織的刺激。大部分臨床學者認為，甲狀腺乳頭狀癌患者長期使用促甲狀腺素(TSH)抑制劑量的甲狀腺素能降低復發(fā)率和死亡率[2,3]。特別是在甲狀腺乳頭狀癌的高危組，內分泌治療可以使病人的無病生存率提高2-3倍[4]。
　　但是，患者長期服用超生

4、理量甲狀腺素會有一定副作用產生。長期TSH抑制會導致患者心率加快，頻發(fā)的房性期前收縮。據統計，TSH抑制使房顫發(fā)生率比正常增加3倍[5]。并且長期TSH抑制可導致絕經后婦女患骨質疏松癥的風險增高，但這一般不發(fā)生于絕經前的女性[6]。而且TSH要發(fā)揮作用必須要與甲狀腺細胞膜上或細胞質中促甲狀腺激素受體(TSHR)相結合。有研究表明:甲狀腺癌細胞的TSHR基因表達存在缺失[7]。TSHR在甲狀腺乳頭狀癌組織中的陽性表達率較低，并且隨著分化型

5、甲狀腺癌臨床分期的增加TSHR陽性表達率逐漸下降[8]。在甲狀腺乳頭狀癌中，TSH高含量與TSHR低表達形成矛盾。這其中的原因并不十分清楚，但是可以肯定的是:促甲狀腺素與促甲狀腺素受體之間的作用復雜，存在多種作用機制[9]。
　　近年來，學術界對TSH治療在甲狀腺乳頭狀癌的抑制作用是否有效依然存在爭議。臨床實際工作中我們發(fā)現:有一部分甲狀腺乳頭狀癌術后的患者，規(guī)律口服甲狀腺素制劑治療的若干年后仍出現了腫瘤的復發(fā)以及頸部淋巴結轉移，

6、需要行二次手術。因此，為了有效降低TSH抑制治療副作的用發(fā)生，實施個體化治療具有重要意義。本研究旨在綜合探討TSH在體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細胞中的作用和意義。
　　方法:取河北省醫(yī)科大學第二醫(yī)院甲狀腺外科2014年10月-2015年1月間術中新鮮甲狀腺乳頭狀癌組織標本5例，經術中冰凍及術后石蠟病理證實。所有甲狀腺乳頭狀癌患者術前均未經過放，化療。將新鮮組織30分鐘內種植培養(yǎng)瓶中，培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細胞。待長成單層細胞后，分為四個組

7、，分別給予不同濃度的TSH(0mU/L、10mU/L、50mU/L、100mU/L)，種于24孔培養(yǎng)板內于實驗10天運用流式細胞儀對細胞的增殖及凋亡進行檢測。各數據采用t檢驗，檢驗標準為P＜0.05有統計學意義。
　　結果:
　　1、甲狀腺乳頭狀癌細胞的培養(yǎng)及觀察
　　甲狀腺乳頭狀癌細胞直接種植于培養(yǎng)瓶中，細胞生長緩慢。細胞培養(yǎng)24h后，可見少量細胞貼壁，細胞呈橢圓形、梭形，可見偽足，細胞不再移動，貼壁主要見于細胞團處

8、，但大量細胞仍懸浮未貼壁，呈圓形，隨培養(yǎng)液移動。4-5d后，大量細胞貼壁。進入甲狀腺乳頭狀癌細胞的潛伏期，期間細胞的偽足進一步伸長，細胞呈多角形，細胞核及細胞體積逐漸增大。5-7d后，細胞進入生長較快增殖期，細胞繼續(xù)伸長且向四周生長，彼此連接，呈長梭形，幾乎無圓形及橢圓形細胞，已貼滿培養(yǎng)瓶底一半以上。7-8d后，于培養(yǎng)瓶中形成單層細胞，于高倍鏡下可見圓形核仁及其他細胞器。
　　2、不同濃度的TSH培養(yǎng)細胞之間的比較
　　2.

9、1根據測定流式細胞儀測定細胞周期，篩選增殖結果，通過統計軟件SPSS13.0，計算多個樣本的t檢驗，P＜0.05，說明各組之間有統計學意義。繪制直方圖。測Pearson相關性R2=0.955，相關性良好且呈正相關。
　　2.2根據流式細胞儀測定細胞凋亡結果，均為小于5％。
　　結論:
　　1、TSH對體外培養(yǎng)甲狀腺乳頭狀癌細胞有誘導增殖作用，且隨著TSH濃度的增加，誘導增殖的能力越強。
　　2、TSH對體外培養(yǎng)甲