駱駝奶對葡聚糖硫酸鈉誘發(fā)的小鼠急慢性腸炎的影響.pdf

1、目的:駱駝對干旱、荒漠地區(qū)的適應能力很強，并且能在此類惡劣環(huán)境中把富含鹽堿的粗硬植物轉化為營養(yǎng)豐富的乳、肉以及毛絨等產品。駱駝泌乳時間長，駱駝奶一方面蛋白質含量與鈣含量都高于牛奶，而另一方面脂肪含量低于牛奶;鐵元素含量是牛奶的10倍，而且尚未見駱駝奶引起過敏的報道，這對于喝牛乳過敏的人來說，駱駝奶就成為了很好的替代品。胃腸道粘膜是對抗異己分子入侵的第一道防線，腸黏膜組織中免疫細胞的組成具有其自身的特殊性，在機體穩(wěn)態(tài)中發(fā)揮著極其重要的作用

2、。腸道免疫系統(tǒng)由腸相關淋巴樣組織、腸黏膜免疫細胞和免疫介質等組成，是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分。一般情況下，黏膜免疫細胞通常對腸道內的正常微生物群和食物抗原表現(xiàn)為免疫耐受，而對于病原微生物則誘發(fā)免疫應答，產生免疫反應。細胞因子主要由免疫細胞分泌，是一種小分子多肽，在機體的免疫應答中具有重要的功能。促炎因子和抗炎因子共同調解，維持局部免疫平衡，生理功能。目前認為，腸道炎癥的啟動及腸道炎癥慢性化在很大程度上與促炎因子和抗炎因子失去平衡有關。

3、促炎因子和抗炎因子的平衡一旦被打破，免疫細胞也可對正常菌群和食物性抗原引起免疫應答，從而產生炎癥反應?；颊吣c黏膜中促炎細胞因子水平升高，抗炎細胞因子水平下降，導致炎癥性腸?。肆_恩病和潰瘍性結腸炎等），且升高的水平與疾病的嚴重程度呈正相關，長時間的免疫調節(jié)失衡促使炎癥趨于慢性化。新近觀點提示，促炎性和抗炎性免疫調節(jié)由細胞內信號機制所介導，這一發(fā)現(xiàn)為未來炎癥性腸病的治療開辟了新的途徑。腸相關淋巴樣組織由派爾集合淋巴結和腸系膜淋巴結組成，腸

4、黏膜免疫細胞主要包括腸上皮細胞、M細胞、巨噬細胞、樹突細胞、上皮內淋巴細胞和固有層淋巴細胞等。炎癥性腸病(IBD)患者腸道免疫耐受機制被破壞，造成部分腸黏膜淋巴細胞增殖，導致大量炎癥介質產生，致炎癥反應的發(fā)生，最終引發(fā)IBD相關癥狀和體征。潰瘍性結腸炎患者腸黏膜中，單核巨噬細胞產生大量TNF-α和IL-1β，致炎癥面積的擴大以及炎癥遞質、破壞性酶類、自由基分泌的增加，發(fā)展成組織損傷的急性炎癥。此外，IL-1β還可通過自分泌或旁分泌刺激其

5、他炎癥遞質如IL-6、IL-8和TNF-α的產生;TNF-α則可使中性粒細胞聚集、內皮細胞黏附分子上調以及增加上皮緊密連接的通透性和抑制上皮細胞的生長等。在各種誘導小鼠結腸炎模型實驗中，硫酸葡聚糖鈉(DSS)誘導的腸炎模型是經典模型之一，也是應用最廣泛的小鼠結腸炎模型。本研究以經口給藥途徑，研究駱駝奶對正常小鼠免疫細胞數量及功能的影響，并建立DSS誘導的急慢性腸炎模型，研究駱駝奶能否在一定程度上預防DSS誘導的腸炎，對DSS誘導的腸炎模

6、型是否也有一定的輔助治療功能。
　　研究方法:1正常小鼠模型:將雄性C57BL/6小鼠（6周齡）隨機分為2組，即灌胃雙蒸水(DDW)對照組和灌胃駱駝奶實驗組，每組3只，連續(xù)灌胃14天。比較C57BL/6品系的正常小鼠喂食駱駝奶組和喂食雙蒸水組腸黏膜組織中免疫細胞數量及比例。2急性腸炎模型:實驗組和對照組小鼠分別連續(xù)14天灌胃駱駝奶和雙蒸水后，經口給予3％DSS，自由飲用，連用5天。第5天處死小鼠。3慢性腸炎模型:實驗組和對照組小鼠

7、分別連續(xù)14天灌胃駱駝奶和雙蒸水后，經口給予1.5％DSS，自由飲用，每5天間隔給DSS，不喂DSS的同時實驗組和對照組小鼠分別繼續(xù)灌胃駱駝奶和雙蒸水，第25天處死小鼠。4取出小鼠盲腸至肛門部全部腸管，采用大體觀察評分和蘇木精-伊紅染色法(HE)評估小鼠腸炎嚴重程度。提取腸黏膜固有層淋巴細胞，流式細胞分析技術(FACS)胞外染色檢測小鼠腸黏膜淋巴組織中自然殺傷細胞，巨噬細胞，樹突狀細胞，調節(jié)性T細胞，記憶性T細胞，B淋巴細胞，中性粒細胞

8、的細胞數量并計算各自在腸道免疫細胞中所占比例。流式細胞分析技術胞內染色檢測腸黏膜固有層淋巴細胞細胞質中IL-10，IL-17A，IFN-γ等細胞因子的產生。酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測細胞培養(yǎng)上清液中細胞因子IL-17A、IL-4、IL-10、IFN-γ、IL-6、IL-1β、IL-23和TNF-α的水平。
　　結果:1.正常小鼠模型中，通過流式細胞分析技術證明，在小鼠腸道黏膜固有層淋巴細胞中實驗組較對照組CD4+T細胞比例

9、和細胞絕對數均增高，產生IFN-γ的CD4+T細胞比例和細胞絕對數均增高(P＜0.05)，酶聯(lián)免疫吸附試驗證明實驗組較對照組IFN-γ分泌量增加，IL-4分泌量降低(P＜0.05)。2.在DSS誘導的小鼠急性腸炎模型中，與對照組比較，實驗組中產生IFN-γ的CD4+CD44+T細胞比例增加，產生IL-17的CD4+CD44+T細胞比例和細胞絕對數均降低(P＜0.05)。實驗組較對照組IFN-γ分泌量增加，IL-4和IL-17分泌量均降低

10、(P＜0.05)。3.DSS誘導的小鼠慢性腸炎模型中，與對照組比較，實驗組中產生IFN-γ的CD4+CD44+T細胞比例和細胞絕對數均下降(P＜0.05)，IFN-γ的分泌量降低(P＜0.05)。
　　結論:1、駱駝奶對正常小鼠具有腸道粘膜免疫功能調節(jié)作用。駱駝奶可以促進CD4+T-LPL細胞增殖和IFN-γ產生。2、駱駝奶對DSS誘導的小鼠急性腸炎模型具有炎癥緩解作用。其機制可能是通過誘導Th1型細胞分化、促進Th1型細胞因子分