三氧化二砷聯(lián)合免疫抑制劑治療再生障礙性貧血的初步研究.pdf

1、再生障礙性貧血(AplasticAnemia，AA)通常是指原發(fā)于骨髓造血功能衰竭的綜合征，是一種病因不明的少見的因造血干細胞障礙導致外周血細胞和骨髓細胞減少的疾病。AA患者骨髓最顯著的病理特征是骨髓脂肪化。目前以抗胸腺細胞免疫球蛋白(AntithymocyteGlobulin，ATG)或抗淋巴細胞免疫球蛋白(AntilymphocyteGlobulin，ALG)為基礎的免疫抑制療法及造血干細胞移植(HematopoieticStemC

2、ellTransplantation，HSCT)已大大改善了AA的愈后，但因高昂的治療費用、ATG/ALG治療后高復發(fā)率、高感染率、供體來源、年齡因素及HSCT并發(fā)癥等，使ATG/ALG治療及HSCT在臨床應用受到了很大的限制。適當濃度的三氧化二砷(arsenictrioxide，ATO)在體外可顯著抑制健康成人骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemcellsMSC)的成脂分化潛能，提示ATO極有可能可通過調控、糾正MSC成脂

3、和成骨分化失衡而改變AA患者骨髓造血微環(huán)境異常。對AA患者骨髓造血微環(huán)境中骨髓MSC的成脂與成骨分化失衡的調節(jié)，無疑可為AA的治療提供一新的切入點。
　　 本研究擬在確認AA患者骨髓MSC成脂和成骨分化異常的基礎上，利用流式細胞術、實時熒光定量PCR及造血干祖細胞體外克隆等研究手段，體內外探討ATO調控AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的有效性。在此基礎上，結合AA的主要發(fā)病機制，體內進一步探討ATO聯(lián)合免疫抑制療法治療AA的

4、安全性與有效性，為治療AA探索新方法。本研究分為基礎研究部分和臨床研究部分。
　　 第一部分，基礎研究部分
　　 三氧化二砷作用于再生障礙性貧血患者骨髓間充質干細胞的初步研究
　　 [目的]探討ATO調控、糾正AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的有效性。
　　 [方法]分別從初治AA患者和健康供者骨髓中分離出骨髓MSC，在實驗組(AA患者BM-MSCs)加入ATO，對照組1(正常BM-MSCs)、對照組

5、2(AA患者BM-MSCs)分別加入等量培養(yǎng)基，分別誘導成脂和成骨，采用細胞形態(tài)學觀察、油紅0染色、VonKossa染色及RQ-PCR等檢測手段，檢測ATO調控AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡的特性。
　　 [結果]對照組2較對照組1形成脂滴時間早、數(shù)量多且體積更大，更易向脂肪細胞分化。對照組2較對照組1出現(xiàn)鈣鹽沉積時間晚、體積小，成骨分化能力明顯減弱。實驗組較對照組2脂滴數(shù)量少、體積小而鈣鹽沉積增多，成脂分化相關基因LPL

6、較對照組2表達明顯降低，而成骨分化相關基因OST較對照組2表達明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義。
　　 [結論]ATO在體外可以糾正AA患者骨髓MSC成脂與成骨分化失衡。
　　 第二部分，臨床研究部分
　　 三氧化二砷聯(lián)合環(huán)孢素治療再生障礙性貧血的臨床觀察
　　 [目的]初步探討ATO聯(lián)合環(huán)孢素治療AN的療效與安全性。
　　 [方法]收集2007年4月至2012年5月期間在河南省腫瘤醫(yī)院血液科接受ATO

7、治療的AN患者。ATO:0.15mg/kg/d，避光連續(xù)靜脈輸注4小時以上，每天1次，連用5天，間隔2天，連用8周;如需要，可休息一周后，再重復上述用藥方式一次，即總療程不超過17周。環(huán)孢素(cyclosporinACsA):5mg/kg/d，定期監(jiān)測血藥濃度，適當調整劑量，維持血漿藥物谷濃度于150～250ng/ml之間，連續(xù)服用至實驗結束后視具體療效再做具體調整。治療期間監(jiān)測血常規(guī)、肝腎功能、心肌酶譜及心電圖等相關輔助檢查，定期復查