不同旋光性蛋氨酸對北京鴨生物學(xué)效價及毒性的比較研究.pdf

1、本論文通過四個試驗研究了L-蛋氨酸和DL-蛋氨酸及添加水平對北京鴨生長性能、屠宰性能、血漿生化和血常規(guī)指標(biāo)的影響，從而估測L-Met相對于DL-Met的生物學(xué)效價，并確定肉鴨蛋氨酸需要量和最大安全限量，并利用RNA-Seq技術(shù)研究了過量蛋氨酸對肉鴨肝臟轉(zhuǎn)錄組的影響，以期為肉鴨生產(chǎn)中晶體蛋氨酸的合理使用和蛋氨酸對肉鴨毒性作用的分子機制研究提供理論依據(jù)。
　　試驗一采用玉米-花生粕型飼糧比較了生長前期北京鴨飼糧中L-Met和DL-Me

2、t的相對生物學(xué)效價。本試驗采用2×7+1雙因子完全隨機試驗設(shè)計，試驗設(shè)1個基礎(chǔ)飼糧對照組（蛋氨酸029％,代謝能1256MJ/Kg，粗蛋白2215％），7個L-Met或DL-Met添加組(003％，006％，010％，014％，019％，024％和029％)，共15個處理組。選取720只1日齡健康雄性北京鴨隨機分為15個處理，每個處理8個重復(fù)，每個重復(fù)6只鴨。試驗期21d。結(jié)果表明:與基礎(chǔ)飼糧組相比，飼糧添加適量L-Met和DL-Met

3、均能顯著提高北京鴨平均體重(ABG)、日增重(ADG)、日采食量(ADFI)和腿肌率(P＜005)。L-Met組，隨飼糧蛋氨酸水平升高，肉鴨ABG和ADG呈現(xiàn)先升高后降低的規(guī)律，而DL-Met組肉鴨ABG和ADG則先升高而后趨于穩(wěn)定。采用二次曲線模型，以ADG為評價指標(biāo)，以L-Met和DL-Met為蛋氨酸源時，獲得的1～21日齡北京鴨飼糧蛋氨酸需要量分別為046％和054％，T檢驗表明以L-Met為蛋氨酸源時肉鴨對蛋氨酸的需要量顯著低于

4、以DL-Met為蛋氨酸源。根據(jù)飼糧蛋氨酸總水平為029％,032％，035％，039％，043％和048％處理組，以ADG為評價指標(biāo)，利用線性斜率比法，估測L-Met相對于DL-Met的生物學(xué)效價為134％。
　　試驗二采用玉米-花生粕型飼糧比較了生長后期北京鴨飼糧中L-Met與DL-Met的相對生物學(xué)效價。本試驗采用2×7+1雙因子完全隨機試驗設(shè)計，試驗設(shè)1個基礎(chǔ)飼糧對照組（蛋氨酸022％，代謝能1275MJ/Kg，粗蛋白181

5、8％），7個L-Met或DL-Met添加組(003％，006％，009％，013％，017％,022％和027％)，共15個處理組。選取720只15日齡健康北京鴨隨機分為15個處理，每個處理6個重復(fù)，每個重復(fù)8只鴨。試驗期21d。結(jié)果表明:與基礎(chǔ)飼糧組相比，飼糧添加適量L-Met和DL-Met均能顯著提高北京鴨生長性能和第四主翼羽長度(P＜005)，有顯著提高胸肌率的趨勢(005＜P＜010)。采用二次曲線模型，以ADG為評價指標(biāo)，以L

6、-Met和DL-Met為蛋氨酸源時，獲得的15～35日齡北京鴨飼糧蛋氨酸需要量分別為041％和037％，但T檢驗表明二者差異不顯著。根據(jù)飼糧蛋氨酸總水平為022％，025％，028％，031％，035％和039％處理組，以ADG為評價指標(biāo)，利用線性斜率比法，估測L-Met相對于DL-Met的生物學(xué)效價為125％。
　　試驗三采用玉米-豆粕型飼糧比較了生長前期北京鴨飼糧中過量的L-Met和DL-Met的相對生物學(xué)效價。本試驗采用2×

7、5+1雙因子完全隨機試驗設(shè)計，試驗設(shè)1個基礎(chǔ)飼糧對照組（蛋氨酸047％，代謝能1203MJ/Kg，粗蛋白1899％），5個L-Met或DL-Met添加組(025％，050％，075％，100％和125％)，共11個處理組。選取492只8日齡健康北京鴨隨機分為11個處理，每個處理7個重復(fù)，每個重復(fù)6只鴨。試驗期21d。結(jié)果表明:與基礎(chǔ)飼糧對照組相比，飼糧蛋氨酸過量時會降低北京鴨ABG、ADG、ADFI、料重比、胸肌率和腹脂率(P＜005)

8、;顯著升高鴨血漿中高半胱氨酸、谷丙轉(zhuǎn)氨酶、總膽紅素、乳酸脫氫酶、平均紅細(xì)胞體積和紅細(xì)胞體積分布寬度(P＜005)，而顯著降低血紅蛋白、平均血紅蛋白含量和平均紅細(xì)胞血紅蛋白濃度(P＜005)，并有降低紅細(xì)胞計數(shù)的趨勢（005＜P＜010）。采用折線模型，以日增重為評價指標(biāo)，以L-Met和DL-Met為蛋氨酸源時，獲得的飼糧蛋氨酸最大安全限量分別為086％和089％，T檢驗表明二者無顯著差異。以日增重和日采食量的抑制程度為評價指標(biāo)，采用線性

9、模型斜率比法，估測L-Met相對于DL-Met的生物學(xué)效價分別是100％和102％。
　　試驗四利用轉(zhuǎn)錄組學(xué)技術(shù)探究過量蛋氨酸對北京鴨產(chǎn)生毒性作用的分子機制。本試驗是在試驗三的基礎(chǔ)上從基礎(chǔ)飼糧組(047％)和蛋氨酸過量組(172％)中分別選取試驗鴨各3只，提取肝臟總RNA進(jìn)行轉(zhuǎn)錄組測序分析。結(jié)果表明，根據(jù)|log2Fold Change|≥058且P-value≤005，共篩選出1082個差異表達(dá)基因，表達(dá)上調(diào)基因467個，表達(dá)下

10、調(diào)基因615個，這些基因主要與脂質(zhì)代謝、能量代謝和線粒體凋亡有關(guān);GO功能富集分析顯示，差異表達(dá)基因主要富集在脂質(zhì)代謝、免疫反應(yīng)和線粒體凋亡等生物學(xué)過程;KEGG Pathway分析顯示，差異表達(dá)基因主要富集在代謝通路、鈣離子信號通路、炎癥因子與其受體相互作用和PPAR信號通路等代謝通路。
　　綜上，飼糧中適量水平的L-Met和DL-Met均能提高生長前期和生長后期北京鴨的生長性能和胴體品質(zhì)，而過量的L-Met和DL-Met均會抑