去白細(xì)胞優(yōu)化富血小板血漿促進(jìn)骨修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的:從細(xì)胞水平和動(dòng)物水平分別比較L-PRP和P-PRP對(duì)成骨相關(guān)細(xì)胞生物學(xué)行為、大鼠顱骨缺損修復(fù)和NF-κB通路的影響，探討去白細(xì)胞優(yōu)化PRP對(duì)骨修復(fù)的作用及其機(jī)制。
　　方法:
　　第一部分：分別使用不同離心參數(shù)制備PCP或P-PRP，檢測(cè)各種PCP和P-PRP的血細(xì)胞成分、血小板功能、生長(zhǎng)因子濃度、炎癥因子濃度，并檢測(cè)各種P-PRP對(duì)HBMSC細(xì)胞增殖、活性和遷移的影響；
　　第二部分：分別制備L-PRP和P-P

2、RP，檢測(cè)兩者的白細(xì)胞、血小板、生長(zhǎng)因子和炎癥因子濃度，并分析PRP細(xì)胞成分對(duì)細(xì)胞因子濃度的影響；
　　第三部分：使用10%FBS、L-PRP或P-PRP培養(yǎng)HBMSC和EaHy926后，檢測(cè)細(xì)胞增殖、活性、遷移，HBMSC成骨分化和EaHy926成管；
　　第四部分：使用10%FBS、L-PRP或P-PRP培養(yǎng)HBMSC和EaHy926后，檢測(cè)NF-κB p65核內(nèi)表達(dá)、COX-2和iNOS基因表達(dá)以及PGE2和NO合成；

3、
　　第五部分：構(gòu)建大鼠顱骨缺損模型，使用單純?chǔ)?TCP或L-PRP、P-PRP預(yù)處理的β-TCP填充治療，并使用CAPE抑制NF-κB通路活化，通過(guò)Micro-CT、序列熒光標(biāo)記、組織學(xué)染色分析骨缺損修復(fù)。
　　結(jié)果:
　　第一部分：以160×g離心10 min繼之以250×g離心15 min的兩次離心法可以在幾乎完全去除紅細(xì)胞和白細(xì)胞的前提下，最大限度回收并富集血小板，同時(shí)保護(hù)血小板功能；進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，該方法制

4、備的P-PRP對(duì)于HBMSC體外增殖和遷移的促進(jìn)作用顯著優(yōu)于其他P-PRP；因此，該方法是制備P-PRP的最佳兩次離心法；
　　第二部分：L-PRP中血小板、PDGF-AB、TGF-β1和VEGF濃度與P-PRP相似而白細(xì)胞、IL-1β和TNF-α濃度則顯著高于P-PRP； PRP中血小板濃度僅與生長(zhǎng)因子濃度正相關(guān)而白細(xì)胞濃度則僅與炎癥因子濃度正相關(guān)；
　　第三部分：L-PRP和P-PRP均可以促進(jìn)HBMSC和EaHy926

5、增殖、活性、遷移，HBMSC成骨分化和EaHy926成管，但是P-PRP的效果顯著優(yōu)于L-PRP；
　　第四部分：L-PRP可以導(dǎo)致HBMSC和EaHy926中NF-κB p65核內(nèi)轉(zhuǎn)移，上調(diào)COX-2和iNOS的mRNA表達(dá)并促進(jìn)其產(chǎn)物PGE2和NO的合成；
　　第五部分：L-PRP和P-PRP均可以促進(jìn)大鼠顱骨缺損修復(fù)，但是P-PRP療效更為顯著，而抑制NF-κB通路激活可以顯著提高L-PRP對(duì)大鼠顱骨缺損的療效。