長鏈非編碼RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌組織中的表達及其作用機制研究.pdf

1、探討長鏈非編碼RNA LINC00261在Barrett食管、食管腺癌組織中的表達及其作用機制。分別通過以下方法進行探討:取20例正常食管鱗狀上皮組織，20例Barrett食管組織及20例食管腺癌組織分別進行石蠟包埋，利用RecoverAlTM Total Nucleic Acid Isolation Kit for FFPE Tissues試劑盒提取總RNA，利用qRT-PCR技術(shù)檢測LINC00261在組織中的表達變化;將正常食管鱗

2、狀上皮細胞系(Het-1A)、Barrett食管細胞系(BE CP-A)及Barrett食管相關(guān)腺癌細胞系（0E33和skgt4）接種于含10％胎牛血清的1640培養(yǎng)基中，置37℃、5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞并利用Takara公司的總mRNA試劑盒提取細胞總RNA，利用qRT-PCR技術(shù)檢測LINC00261在細胞中的表達變化;將人胚胎干細胞培養(yǎng)于人胚胎成纖維細胞飼養(yǎng)層，取對數(shù)生長期細胞分別給予不同濃度的酸暴露及膽酸(總濃

3、度0，100，300，1000μM)處理，并于處理24，48，72h后提取細胞總RNA;采用qRT-PCR法檢測LINC00261的表達變化;采用生物信息學(xué)的方法分析LINC00261可能調(diào)控的下游靶基因;構(gòu)建LINC00261慢病毒載體并轉(zhuǎn)染人胚胎干細胞，qRT-PCR技術(shù)驗證LINC00261在細胞中的表達變化，采用Western blot技術(shù)檢測LINC00261慢病毒轉(zhuǎn)染后FOXA2蛋白表達水平的變化;采用FOXA2慢病毒表達載

4、體轉(zhuǎn)染人胚胎干細胞，觀察高表達FOXA2對酸暴露及膽酸處理后人胚胎干細胞中CDX2及MUC2蛋白表達的影響;采用SPSS17.0統(tǒng)計學(xué)軟件對實驗結(jié)果進行分析，P＜0.05認為差異具有顯著性。
　　通過上述研究發(fā)現(xiàn)，與正常食管鱗狀上皮組織相比，LINC00261在Barrett食管及食管腺癌組織標(biāo)本中表達均顯著上調(diào);與正常食管鱗狀上皮細胞系相比，LINC00261在Barrett食管細胞系及Barrett食管相關(guān)腺癌細胞系中表達水平

5、也顯著增高;與正常對照組相比，酸暴露及膽酸誘導(dǎo)可導(dǎo)致LINC00261表達顯著上調(diào)，并表現(xiàn)出一定的濃度依賴性及時間依賴性;生物信息學(xué)分析表明LINC00261恰好位于叉頭框蛋白A2(forkhead box protein A2，F(xiàn)OXA2)上游啟動子區(qū)域，提示LINC00261可能參與FOXA2表達的負性調(diào)控;進一步實驗發(fā)現(xiàn)高表達LINC00261可顯著抑制FOXA2蛋白的表達水平;酸暴露及膽酸可誘導(dǎo)人胚胎干細胞FOXA2表達下調(diào)，C