貓杯狀病毒感染抑制Ⅰ型干擾素信號通路的分子機制.pdf

1、固有免疫是宿主抵抗病原微生物入侵的第一道防線，宿主的模式識別受體能夠?qū)Σ≡嚓P(guān)分子模式進行識別，進而激活固有免疫系統(tǒng)，最終釋放干擾素和炎癥因子等一系列細(xì)胞因子通過抗病毒或參與炎癥反應(yīng)等發(fā)揮作用。Ⅰ型干擾素可以通過JAK/STAT通路激活數(shù)以百計的干擾素刺激基因(ISGs)轉(zhuǎn)錄表達，從而發(fā)揮抗病毒作用。而病毒也進化出了許多對抗宿主抗病毒反應(yīng)的策略，尤其是對抗宿主的固有免疫系統(tǒng)。因此研究固有抗病毒免疫和病毒對固有免疫系統(tǒng)的抑制，對于基礎(chǔ)研究

2、和臨床應(yīng)用都有很大的意義。
　　貓杯狀病毒(FCV)是杯狀病毒科，水瘡性病毒屬（Vesivirus）成員，感染貓后可引起上呼吸道疾病和急性口腔炎潰瘍，病情嚴(yán)重的，可引起感染貓的死亡。同病毒科的人諾如病毒是引起急性胃腸炎和腹瀉最重要的病原之一。目前還沒有對抗人諾如病毒的有效藥物和疫苗，主要原因是一直以來人諾如病毒的體外培養(yǎng)技術(shù)都不成熟。此外杯狀病毒與宿主免疫系統(tǒng)的相互作用研究相對較少，F(xiàn)CV體外培養(yǎng)技術(shù)比較成熟，是目前研究人諾如病毒

3、最好的模式病毒之一，研究FCV與固有免疫系統(tǒng)的關(guān)系對整個杯狀病毒科的研究都有很重要的意義。
　　本研究首先應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)篩選FCV感染CRFK細(xì)胞前后的差異表達蛋白，共篩選到差異蛋白429個，其中229個蛋白表達量升高，有200個蛋白表達量降低;與固有免疫相關(guān)的蛋白有IFNAR1、IRF1、IRF9、IFI35、IFIT3、PKR和ISG15等，且這些蛋白表達量都發(fā)生了不同程度的下調(diào);其中IFNAR1為Ⅰ型干擾素受體組分，IR

4、F1為Ⅰ型干擾素信號通路重要調(diào)控分子，該發(fā)現(xiàn)為FCV抑制Ⅰ型干擾素通路研究奠定基礎(chǔ)。
　　其次，通過IFN-α抗病毒試驗，發(fā)現(xiàn)IFN-α不能夠抑制FCV復(fù)制，Western blot和流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果表明FCV感染后下調(diào)了IFNAR1在細(xì)胞表面的表達量，qRT-PCR、半定量PCR和Northern blot結(jié)果表明FCV感染后IFNAR1的mRNA表達量減少，最終發(fā)現(xiàn)FCV非結(jié)構(gòu)蛋白PP和p30可以抑制共轉(zhuǎn)染質(zhì)粒的表達，且PP和p

5、30轉(zhuǎn)染后可以使IFNAR1的mRNA表達量降低。
　　此外，克隆了貓源IRF1(Fe-IRF1)，瞬時轉(zhuǎn)染Fe-IRF1后可以顯著抑制FCV的復(fù)制。雙熒光素酶試驗結(jié)果表明Fe-IRF1通過激活Ⅰ型干擾素通路發(fā)揮抗病毒作用;Western blot結(jié)果表明FCV感染可以下調(diào)IRF1蛋白表達量;qRT-PCR結(jié)果表明FCV感染可以下調(diào)IRF1的mRNA表達量。
　　總之，本研究應(yīng)用差異蛋白質(zhì)組學(xué)方法，篩選到FCV感染后下調(diào)表達