利拉魯肽對高脂喂養(yǎng)大鼠棕色脂肪組織標志性基因表達的影響.pdf

1、肥胖是由多種因素引起的以體內脂肪細胞的體積和數量增加為特點的一種臨床狀態(tài)，它是眾多疾病（如2型糖尿病、代謝綜合征、心血管疾病、非酒精性脂肪肝等）的一個重要風險因素。但是，體內的脂肪組織并不都是“有害”的。
　　根據脂肪細胞結構和功能的不同，哺乳動物體內的脂肪組織分為兩種：白色脂肪組織（WAT）和棕色脂肪組織（BAT）。WAT即我們通常所說的脂肪組織，廣泛分布于皮下和內臟周圍，主要由白色脂肪細胞聚集而成，其功能是將體內過剩的能量以甘

2、油三酯的形式儲存起來；BAT主要分布于頸背部、腋窩及肩胛間區(qū)，由棕色脂肪細胞組成，細胞內含有豐富的線粒體，棕色脂肪的主要生理作用是非寒顫性產熱，可通過解偶聯(lián)作用將體內過多的脂肪分解和消耗。除了經典的棕色脂肪細胞和白色脂肪細胞，最近人們發(fā)現了一種米色脂肪細胞，它是在某些刺激條件下，“白色脂肪棕色化”過程中產生的存在于白色脂肪組織中的“棕色樣”脂肪細胞，與經典的棕色脂肪細胞有著相似的作用。
　　利拉魯肽是人胰高血糖素樣肽-1（GLP-

3、1）的一種類似物，它能夠以葡萄糖濃度依賴的模式刺激胰島素的分泌，同時以葡萄糖濃度依賴的模式降低過高的胰高糖素的分泌。因此，臨床上利拉魯肽主要用于治療2型糖尿病。但是，最近有研究發(fā)現，GLP-1可促進棕色脂肪前體細胞向成熟的棕色脂肪細胞分化，并且通過腦室內注射GLP-1受體激動劑可增加棕色脂肪組織活性，促進棕色脂肪組織產熱。
　　本課題通過對高脂喂養(yǎng)大鼠注射利拉魯肽，并檢測其棕色脂肪組織中標志性基因蛋白及mRNA的表達，探討了利拉魯

4、肽對棕色脂肪功能的影響，揭示了利拉魯肽減肥作用的可能機制。本研究可為未來臨床上肥胖及其相關代謝性疾病的預防和治療提供新的思路。
　　目的：研究利拉魯肽對高脂喂養(yǎng)大鼠棕色脂肪組織中標志性基因表達的影響，并探討利拉魯肽對這些基因表達的影響與其濃度的關系。
　　方法：清潔級健康雄性SD大鼠40只（體重240g-260g），適應性喂養(yǎng)1周后隨機分為5組：正常對照組（Con）、高脂對照組（HF）、利拉魯肽低劑量組（Lira-L）（0.

5、4mg/kg/d）、利拉魯肽中劑量組（Lira-M）（0.6mg/kg/d）、利拉魯肽高劑量組（Lira-H）（0.8mg/kg/d），每組8只。正常對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，熱量組成：碳水化合物65.5％，脂肪10.3%，蛋白質24.2%，總熱量為348kcal/100g；高脂對照組及利拉魯肽低、中、高劑量組均給予高脂飼料喂養(yǎng)，熱量組成：碳水化合物20.1%，脂肪59.8%，蛋白質20.1%，總熱量為501kcal/100g；每天給予各

6、組等熱量的普通飼料或高脂飼料。將6mg（1ml）利拉魯肽溶于11ml生理鹽水中，配制成濃度為0.5mg/ml的混合液，分別給予利拉魯肽低、中、高劑量組0.4mg/kg/d、0.6mg/kg/d、0.8mg/kg/d利拉魯肽日二次皮下注射，正常對照組及高脂對照組分別給予等量生理鹽水日二次皮下注射，分別干預12周。于12周末稱重后處死大鼠，留取血清及肩胛部棕色脂肪組織，稱量肩胛部棕色脂肪組織的重量；檢測血清生化學指標；HE染色觀察大鼠棕色脂

7、肪組織形態(tài)學變化；Real-TimePCR檢測棕色脂肪組織中解偶聯(lián)蛋白-1（UCP1）、過氧化物酶體增殖物激活受體γ（PPARγ）、細胞死亡誘導的DFFA樣效應因子A（CIDEA）、過氧化物酶體增生物激活受體輔助活化因子1α（PGC-1α）、CCAAT增強子結合蛋白β（CEBPβ）、PR結構域家族的第16個成員（PRDM16）的mRNA表達水平；WesternBlot檢測棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CE

8、BPβ、PRDM16蛋白表達水平。
　　結果：
　　1.12周末大鼠體重及棕色脂肪重量的結果：
　　（1）體重：實驗起始時各組大鼠體重無明顯差異，干預12周后，利拉魯肽低、中劑量組大鼠體重均明顯低于高脂對照組和正常對照組，利拉魯肽高劑量組大鼠體重低于高脂對照組，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（Fig.1，Table1）（P＜0.05），但利拉魯肽低、中、高劑量組之間大鼠體重無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　

9、（2）棕色脂肪重量：12周末棕色脂肪組織重量各組間無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　?。?）棕色脂肪重量/體重：利拉魯肽低、中、高劑量組大鼠棕色脂肪重量/體重比值大于高脂對照組（P＜0.05），但利拉魯肽低、中、高劑量組之間比值無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　2.血清生化學指標：
　　與正常對照組相比，高脂對照組血清葡萄糖、甘油三酯水平升高（P＜0.05）；利拉魯肽各組與高脂對照組相比，血清葡萄糖、甘油三酯水平下降

10、（P＜0.05），與正常對照組相比，無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　3.HE染色結果：
　　利拉魯肽各組與高脂對照組相比，棕色脂肪細胞數量增加，棕色脂肪細胞內的空泡相對較小，胞漿含量較多；與正常對照組相比，形態(tài)學上無明顯差異。
　　4.12周末大鼠棕色脂肪組織中標志性基因分子水平的表達：
　　與正常對照組相比，高脂對照組大鼠棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16

11、的mRNA表達下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；與高脂對照組相比，利拉魯肽干預后UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16的mRNA表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；利拉魯肽各劑量組之間UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16的mRNA表達無統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。
　　5.12周末大鼠棕色脂肪組織中標志性基因蛋白水平的表達：
　　與正常對照

12、組相比，高脂對照組大鼠棕色脂肪組織中UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達水平下降，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；與高脂對照組相比，利拉魯肽干預后UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達上調，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05)；利拉魯肽各劑量組之間UCP1、PPARγ、CIDEA、PGC-1α、CEBPβ、PRDM16蛋白的表達無統(tǒng)計學差異（P＞0